جستجوی مقالات مرتبط با کلیدواژه « پروتئین های مهار کننده فعالیت آنزیم پلی گالاکتوروناز » در نشریات گروه « زیست شناسی »
تکرار جستجوی کلیدواژه «پروتئین های مهار کننده فعالیت آنزیم پلی گالاکتوروناز» در نشریات گروه «علوم پایه»-
قارچهای بیماریزای کلزا که سالانه خسارت زیادی را به این محصول وارد می کنند برای نفوذ در گیاه، با ترشح آنزیمهایی باعث تجزیه مولکولهای دیواره سلولی آنها می شوند. در طی تکامل در گیاهان، پروتئینهایی برای مهار این آنزیمها بوجود آمده است. PGIP1 از جمله این پروتئینها بوده که قدرت نفوذ قارچ در گیاه را مهار می نماید. در این تحقیق با توجه به اینکه آنتی بادی علیه پروتئین PGIP1 لوبیا به صورت تجاری موجود نمی باشد و از طرفی جهت تایید بیان PGIP1 در گیاهان کلزای تراریخت بدست آمده نیاز به آنتی بادی مربوطه می باشد، لذا اقدام به تولید پروتئین PGIP1 در سیستم پروکاریوتی و استفاده از آن جهت تولید آنتی بادی علیه آن گردید. بدین منظور ژن کد کننده PGIP1 کلون شده در pUC19 بوسیله آغازگرهای اختصاصی RB وRB2H (به ترتیب حاوی سایتهای Nde1 وXho1) تکثیر و پس از هضم با این دو آنزیم در ناقل pET26b(+) کلون گردید. پلاسمید حاصله پس از تاییدهای مولکولی به میزبان بیانی E. coli BL21 (DE3)pLysS منتقل گردید. جهت بهینه سازی شرایط بیان ژن مورد نظر، شرایط مختلفی شامل، غلظتهای متفاوتIPTG، دماهای متفاوت کشت و OD زمان القا در کلونی های متفاوت مورد بررسی قرار گرفت و نهایتا OD=0.3، دمای 37 درجه سانتی گراد و IPTG =0.5mM بعنوان بهترین شرایط بیانی معرفی گردید. از آنجا که توالی هیستیدین در انتهای پروتئین کد شده وجود دارد، جهت تایید بیان پروتئین PGIP1 توسط آزمون وسترن بلات از آنتی بادی Anti-His استفاده گردید. پروتئین خالص شده در شش نوبت به دو خرگوش تزریق شد. جهت بررسی میزان تیتر آنتی بادی از آزمون الایزا استفاده گردید. از آنتی بادی تولید شده جهت تایید بیان پروتئین PGIP1 تولید شده در گیاهان کلزای تراریخت استفاده گردید. نتایج حاصل از آزمون وسترن بلات وجود پروتئین مورد نظر را در پروتئینهای استخراج شده از برگ گیاهان کلزای تراریخت در مقایسه با کلزای غیر تراریخت تایید نمود.
کلید واژگان: گیاه کلزا, آنتی بادی, پروتئین های مهار کننده فعالیت آنزیم پلی گالاکتوروناز, گیاه تراریخت}Antibody Production against the heterologous expressed PGIP1 to confirm the transgenic canola plantsPhytopathogenic fungi cause serious yield losses of oilseed crops including canola. Many phytopathogenic fungi produce polygalacturonase enzymes (PGs) which are thought to play an important role to degrade the pectin component of plant cell walls. On the other hand polygalacturonase-inhibiting proteins (PGIPs) which are cell wall bounded proteins are secreted by plants and they defend the cell walls against PGs. Due to the lack of commercial PGIP1 antibody, in this study PGIP1 was expressed in prokaryotic system to be used for production of antibody. The pgip gene was amplified using two primers RB and RB2H contaning NdeI and XhoI sites respectively and cloned in pET26b(+).The new construct was confirmed and transferred to E. coli BL21 (DE3) pLysS. The optimized conditions for expression of PGIP1 was IPTG = 0.5mM, OD = 0.3 and 37ºC for culture temperature. The expression of PGIP1 was confirmed using Anti-His antibody due to the presence of His-tag in expressed protein. The antibody against the expressed protein (PGIP1) was produced and the obtaining serum tested by Elisa. This antibody used for Western blotting to confirm the presence of the expressed PGIP1 in protein profile of transgenic canola plants. Western blot analysis of transgenic lines compared to non-transgenic line of canola plants confirmed the expression of PGIP1 in transgenic lines.
- نتایج بر اساس تاریخ انتشار مرتب شده‌اند.
- کلیدواژه مورد نظر شما تنها در فیلد کلیدواژگان مقالات جستجو شده‌است. به منظور حذف نتایج غیر مرتبط، جستجو تنها در مقالات مجلاتی انجام شده که با مجله ماخذ هم موضوع هستند.
- در صورتی که می‌خواهید جستجو را در همه موضوعات و با شرایط دیگر تکرار کنید به صفحه جستجوی پیشرفته مجلات مراجعه کنید.
©2000-2024 magiran.com All Rights Reserved.