جستجوی مقالات مرتبط با کلیدواژه « littolaris » در نشریات گروه « زراعت »

تکرار جستجوی کلیدواژه «littolaris» در نشریات گروه «کشاورزی»

انتخاب همه

کلونینگ و ارزیابی بیوانفورماتیکی ژن مونودهیدروآسکوربات ردوکتاز (MDHAR) در گیاه آلوروپوس لیتورالیس و بررسی بیش بیان آن در گیاه توتون (Nicotina tobacum)

آزاده محسنی، قربانعلی نعمت زاده، علی دهستانی کلاگر، بهزاد شاهین کلیبر، الهام سلیمانی

پژوهشنامه اصلاح گیاهان زراعی، پیاپی 17 (بهار 1395)، صص 219 -230

شوری خاک یکی از مهم ترین عوامل غیرزنده ، با برهم زدن شرایط مطلوب است که سبب بروز اختلالات متابولیسمی در سلول های گیاهی، از جمله افزایش تولید انواع گونه های اکسیژن فعال (ROS) می گردد .مونودهیدروآسکوربات ردوکتاز (MDHAR) یکی از آنزیم های کلیدی در مسیر گلوتاتیون-آسکوربات است که نقش احیاکنندگی رادیکال های مونودهیدروآسکوربات را بر عهده دارد. در تحقیق حاضر آنزیم مونودهیدرو آسکوربات ردوکتاز، از گیاه هالوفیت آلوروپوس لیتورالیس (Aeluropus littoralis) شناسایی، جداسازی و هم سانه سازی گردید و به گیاه توتون انتقال داده شد. برای این منظور با توجه به اطلاعات در دسترس در پایگاه NCBI، پرایمرهای مناسب طراحی و با روش RT-PCR توالی ژنی مذکور تکثیر و به منظور توالی یابی در وکتور pTZ57R/T درون باکتری ای.کلای (DH5α) هم سانه سازی شد. سپس به منظور انتقال به گیاه توتون، با آنزیم pfu دی. ان. آ. پلیمراز تکثیر گردید. پس از الحاق پروموتر و ترمیناتور 35S به ناقل بیانی pGreen0029، توالی ژنی MDHAR نیز به این ناقل وارد شد و سازه ی نوترکیب به سلول های اگروباکتریوم نژاد LBA4404 ترانسفورم شد و برای تراریخت سازی توتون به روش دیسک برگی مورد استفاده قرار گرفت. از گیاهان باززایی شده در محیط انتخابی حاوی آنتی بیوتیک کانامایسین استخراج DNA و سپس RNA صورت گرفت و آزمون های PCR و RT-PCR انجام شد. آزمون PCR با DNA گیاهان انتخابی نشان داد توالی ژنی MDHAR به سلول های گیاهان تراریخت وارد شده و بیان مستمر این ژن نیز توسط آزمون RT-PCR تایید شد. بررسی های بیوانفورماتیکی روی ژن نشان داد که ژن MDHAR شامل 1436 جفت باز و فاقد نواحی اینترونی است. مقایسه ی توالی به دست آمده با توالی های سایر MDHAR های گیاهی ثبت شده در بانک ژن، بیانگر شباهت بالای این ژن با سایر MDHR های جدا شده از گیاهان خانواده ی گندمیان بوده که با MDHAR سورگم (Sorghum bicolor)، بیشترین شباهت را داشت. آنالیز ساختار پروتئینی، بین سلولی بودن و نواحی موتیف pyr-redoxin و SDR را اثبات کرده و نیز بررسی ساختار ثانویه، نشان دهنده ی 3/78 درصد ساختار مارپیچ آلفا، 1/41 درصد ساختار چین خورده ی بتا و 6/13 درصد ساختار دور بتا یا دور معکوس بود.

کلید واژگان: گونه های اکسیژن فعال, مونودهیدروآسکوربات ردوکتاز (MDHAR), آلوروپوس لیتورالیس, ناقل pGreen0029, توتون, تراریخت}

چکیده مشاهده متن زبان: فارسی

Cloning and Bioinformatics Analysis of MDHAR Gene from Aeluropus Littoralis and Over-Expression Analysis in Nicotina Tabacum

Azadeh Mohseni, Ghorbanali Nematzadeh, Ali Dehestani Kelagari, Behzad Shahin Kaleybar, Elham Soleimani

Journal of Crop Breeding, Volume:8 Issue: 17, 2016, PP 219 -230

Salinity as one of the most important stresses disturbs favorable growth conditions of the plants leading to several metabolic disorders such as reactive oxygen species (ROS). Monodehydroascorbate reductase (MDHAR) with FAD (Flavin adenine dinucleotide) co-factor is one of the key enzymes in Glutathione-ascorbate pathway which reduces monodehydroascorbate (MDHA) radicals. In this study MDHAR gene was isolated from Aeluropus littolaris¡ a halophyte plant with¡ characterized and was transferred to tobacco plants after cloning. Gene specific primers were designed using similar sequences in NCBI and the desired sequence was amplified via RT-PCR¡ cloned in pTZ57R/T vector and sequenced. Primary bioinformatics assessments revealed that MDHAR gene consisted of 1436 bp lacking intron sequences. For tobacco transformation¡ cDNA fragment was amplified with Pfu DNA polymerase¡ inserted into pGreen0029 containing 35s promoter and terminator sequences. The recombinant vector was then introduced to LBA4404 agrobacterium cells¡ which were used for tobacco transformation via leaf disc method PCR analysis of the putative transgenic plants¡ indicated successful gene insertion into plant cells and gene transcription was confirmed by RT-PCR. Comparing which MDHAR sequences form other plants in NCBI¡ A. littoralis gene exhibited a high similarity with genes isolated from gramineae family. The highest similarity (89%) was observed for MDHARs from sorghum (Sorghum bicolor). Protein also analysis has proven that this gene is outside cell¡ pyr-redoxin and NAD-binding motif area. Secondary structure showed 78.3% alpha helix¡ 41.1% beta sheet and structure 13.6% B-turn structure or reverse turn.

Keywords: littolaris, Mono Dehydro Ascorbate Reductase (MDHAR), Pgreen Vector, Reactive Oxygen Spices (ROS), Tobacco, Transgenic}

Abstract View Paper Original: Persian

نکته

نتایج بر اساس تاریخ انتشار مرتب شده‌اند.
کلیدواژه مورد نظر شما تنها در فیلد کلیدواژگان مقالات جستجو شده‌است. به منظور حذف نتایج غیر مرتبط، جستجو تنها در مقالات مجلاتی انجام شده که با مجله ماخذ هم موضوع هستند.
در صورتی که می‌خواهید جستجو را در همه موضوعات و با شرایط دیگر تکرار کنید به صفحه جستجوی پیشرفته مجلات مراجعه کنید.

به جمع مشترکان مگیران بپیوندید!

جستجوی مقالات مرتبط با کلیدواژه « littolaris » در نشریات گروه « زراعت »