جستجوی مقالات مرتبط با کلیدواژه « pgreen vector » در نشریات گروه « زراعت »
تکرار جستجوی کلیدواژه «pgreen vector» در نشریات گروه «کشاورزی»-
شوری خاک یکی از مهم ترین عوامل غیرزنده ، با برهم زدن شرایط مطلوب است که سبب بروز اختلالات متابولیسمی در سلول های گیاهی، از جمله افزایش تولید انواع گونه های اکسیژن فعال (ROS) می گردد .مونودهیدروآسکوربات ردوکتاز (MDHAR) یکی از آنزیم های کلیدی در مسیر گلوتاتیون-آسکوربات است که نقش احیاکنندگی رادیکال های مونودهیدروآسکوربات را بر عهده دارد. در تحقیق حاضر آنزیم مونودهیدرو آسکوربات ردوکتاز، از گیاه هالوفیت آلوروپوس لیتورالیس (Aeluropus littoralis) شناسایی، جداسازی و هم سانه سازی گردید و به گیاه توتون انتقال داده شد. برای این منظور با توجه به اطلاعات در دسترس در پایگاه NCBI، پرایمرهای مناسب طراحی و با روش RT-PCR توالی ژنی مذکور تکثیر و به منظور توالی یابی در وکتور pTZ57R/T درون باکتری ای.کلای (DH5α) هم سانه سازی شد. سپس به منظور انتقال به گیاه توتون، با آنزیم pfu دی. ان. آ. پلیمراز تکثیر گردید. پس از الحاق پروموتر و ترمیناتور 35S به ناقل بیانی pGreen0029، توالی ژنی MDHAR نیز به این ناقل وارد شد و سازه ی نوترکیب به سلول های اگروباکتریوم نژاد LBA4404 ترانسفورم شد و برای تراریخت سازی توتون به روش دیسک برگی مورد استفاده قرار گرفت. از گیاهان باززایی شده در محیط انتخابی حاوی آنتی بیوتیک کانامایسین استخراج DNA و سپس RNA صورت گرفت و آزمون های PCR و RT-PCR انجام شد. آزمون PCR با DNA گیاهان انتخابی نشان داد توالی ژنی MDHAR به سلول های گیاهان تراریخت وارد شده و بیان مستمر این ژن نیز توسط آزمون RT-PCR تایید شد. بررسی های بیوانفورماتیکی روی ژن نشان داد که ژن MDHAR شامل 1436 جفت باز و فاقد نواحی اینترونی است. مقایسه ی توالی به دست آمده با توالی های سایر MDHAR های گیاهی ثبت شده در بانک ژن، بیانگر شباهت بالای این ژن با سایر MDHR های جدا شده از گیاهان خانواده ی گندمیان بوده که با MDHAR سورگم (Sorghum bicolor)، بیشترین شباهت را داشت. آنالیز ساختار پروتئینی، بین سلولی بودن و نواحی موتیف pyr-redoxin و SDR را اثبات کرده و نیز بررسی ساختار ثانویه، نشان دهنده ی 3/78 درصد ساختار مارپیچ آلفا، 1/41 درصد ساختار چین خورده ی بتا و 6/13 درصد ساختار دور بتا یا دور معکوس بود.کلید واژگان: گونه های اکسیژن فعال, مونودهیدروآسکوربات ردوکتاز (MDHAR), آلوروپوس لیتورالیس, ناقل pGreen0029, توتون, تراریخت}Salinity as one of the most important stresses disturbs favorable growth conditions of the plants leading to several metabolic disorders such as reactive oxygen species (ROS). Monodehydroascorbate reductase (MDHAR) with FAD (Flavin adenine dinucleotide) co-factor is one of the key enzymes in Glutathione-ascorbate pathway which reduces monodehydroascorbate (MDHA) radicals. In this study MDHAR gene was isolated from Aeluropus littolaris¡ a halophyte plant with¡ characterized and was transferred to tobacco plants after cloning. Gene specific primers were designed using similar sequences in NCBI and the desired sequence was amplified via RT-PCR¡ cloned in pTZ57R/T vector and sequenced. Primary bioinformatics assessments revealed that MDHAR gene consisted of 1436 bp lacking intron sequences. For tobacco transformation¡ cDNA fragment was amplified with Pfu DNA polymerase¡ inserted into pGreen0029 containing 35s promoter and terminator sequences. The recombinant vector was then introduced to LBA4404 agrobacterium cells¡ which were used for tobacco transformation via leaf disc method PCR analysis of the putative transgenic plants¡ indicated successful gene insertion into plant cells and gene transcription was confirmed by RT-PCR. Comparing which MDHAR sequences form other plants in NCBI¡ A. littoralis gene exhibited a high similarity with genes isolated from gramineae family. The highest similarity (89%) was observed for MDHARs from sorghum (Sorghum bicolor). Protein also analysis has proven that this gene is outside cell¡ pyr-redoxin and NAD-binding motif area. Secondary structure showed 78.3% alpha helix¡ 41.1% beta sheet and structure 13.6% B-turn structure or reverse turn.Keywords: littolaris, Mono Dehydro Ascorbate Reductase (MDHAR), Pgreen Vector, Reactive Oxygen Spices (ROS), Tobacco, Transgenic}
-
بی فنیل های پلی کلرینه شده (PCBs)، ترکیبات حلقوی کلرداری هستند که به دلیل خواصی چون مقاومت به حرارت و پایداری، در سطح گسترده در دهه های 1930 تا 1980 در صنایع گوناگون کاربرد داشته اند. همین ویژگی پایداری و مقاوت به تجزیه شدن همراه با تاثیرات زیانبار بر سلامت انسان، سبب شد که تولید آنها از دهه 1980 میلادی متوقف شود. در حال حاضر، آلودگی آب ها و خاک های سراسر جهان به PCBs، یکی از مشکلات مهم محیط زیست به شمار می آید. یکی از راه های کاهش آلودگی به PCBs انتقال و بیان ژن های باکتریایی بی فنیل دی اکسیژناز (BPDO) که دارای توانایی تجزیه PCBs هستند به گیاهان است. هدف پژوهش حاضر، یافتن روشی برای انتقال همزمان ژن های bph A، bph E و bph G، که اجزای رمزدهنده آنزیم BPDO هستند به گیاه آرابیدپسیس بود. براساس نتایج به دست آمده، 3 ژن bph A، bph E و bph G که در ناقل pGreen کلون شده بودند به باکتری های E.coli و اگروباکتریوم های LBA4404 و C58C1 و در انتها به گیاه آرابیدپسیس انتقال یافتند. از لحاظ کارایی انتقال ژن به گیاه، بین دو سویه اگروباکتریوم LBA4404 و C58C1 به کار رفته در این پژوهش اختلاف وجود داشت. بیشترین تعداد گیاهان تراریخته (85/ 0 درصد) با سویهLBA4404 به دست آمد. تراریخت بودن گیاهچه های آرابیدوپسیس با انتخاب گیاهان کاملا سبز در محیط دارای 50 میلی گرم در لیتر کانامایسین و همچنین آزمون PCR تایید شد. گیاهان تراریخت با موفقیت به خاک انتقال یافتند و به رشد خود ادامه دادند.
کلید واژگان: بی فنیل های پلی کلرینه, گیاه آرابیدوپسیس, ناقل pGreen}Polychlorinated biphenyls (PCBs) are chlorinated biphenyl rings that due to their properties such as heat resistance and stability were widely used in different industries from 1920s to 1980s. Due to their characteristics such as stability, resistance to decomposition and harmful effects on human health, their production was banned in 1980s., Worldwide contamination of water and soil with PCBs is one of the important environmental problems at present time. A way to reduce PCBs contamination is transformation and expression of biphenyl dioxygenase (BPDO) genes having catabolic degradation activity of polychlorinated biphenyls into plants. The aim of present study was developing a method for simultaneous transformation of bphA, bphE, and bphG genes, coding for the components of BPDO enzyme, into Arabidopsis plants. According to obtained results, three bphA, bphE, and bphG genes cloned into pGreen vector were transformed into E.coli, Agrobacterium and as well as Arabidopsis plants. There were differences in transformation efficiency of two strains LBA4404 and C58C1 of Agrobacterium, used in this study. The highest number of transgenic plants 0.85%% was obtained by LBA4404 strain. The transgenic nature of Arabidopsis plantlets was confirmed by selecting fully green plants on 50 mg/l Kanamycin as well as PCR analysis. Transgenic plants were successfully transferred into soil and continued their growth.Keywords: Arabidopsis plant, chlorinated biphenyls enzyme, pGreen vector}
نکته
- نتایج بر اساس تاریخ انتشار مرتب شده‌اند.
- کلیدواژه مورد نظر شما تنها در فیلد کلیدواژگان مقالات جستجو شده‌است. به منظور حذف نتایج غیر مرتبط، جستجو تنها در مقالات مجلاتی انجام شده که با مجله ماخذ هم موضوع هستند.
- در صورتی که می‌خواهید جستجو را در همه موضوعات و با شرایط دیگر تکرار کنید به صفحه جستجوی پیشرفته مجلات مراجعه کنید.
©2000-2024 magiran.com All Rights Reserved.