جستجوی مقالات مرتبط با کلیدواژه "لیپوپروتئین مرتبط با پپتیدوگلیکان" در نشریات گروه "پزشکی"

جستجوی لیپوپروتئین مرتبط با پپتیدوگلیکان در مقالات مجلات علمی

انتخاب همه

بهینه سازی بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب لیپوپروتئین مرتبط با پپتیدوگلیکان (PAL) باکتری لژیونلا پنوموفیلا

ابوالفضل قلی پور، سید مجتبی موسویان، حمید گله داری، منوچهر مکوندی، سیدعلی مرد، حمید رجبی معماری، رضا ایمانی، ندا سلیمانی، امیر هوشنگ الوندی

مجله دانشگاه علوم پزشکی شهرکرد، سال چهاردهم شماره 3 (پیاپی 59، امرداد و شهریور 1391)، صص 1 -11

زمینه و هدف
اکثر تست های موجود برای تشخیص پنومونی لژیونلایی، با مشکلات زیادی از جمله حساسیت و ویژگی پائین و عدم توانایی در فراهم نمودن نتیجه در یک زمان کلینیکی مناسب مواجه هستند. از آنجایی که لیپوپروتئین مرتبط با پپتیدوگلیکان (PAL) لژیونلا پنوموفیلا در درون ادرار ترشح شده و به عنوان یک آنتی ژن در تمام سویه های آن وجود دارد. لذا برای تشخیص بیماری لژیونر از طریق ادرار مورد توجه قرار گرفته است. هدف از این مطالعه بهینه سازی بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب PAL باکتری لژیونلا پنوموفیلا بوده است.
روش بررسی
در این مطالعه تجربی آزمایشگاهی بیان پروتئین PAL با تغییر در پارامترهای دانسیته سلولی، مدت زمان القاء، دمای رشد، غلظت ایزوپروپیل بتا دی تیوگالاکتوپیرانوزید (IPTG) و نوع محیط کشت مورد بررسی قرار گرفت. پس از کلونینگ، عصاره پری پلاسمی تهیه و پروتئین نوترکیب PAL با استفاده از ستون رزین نیکل نیتروتری استیک اسید (NTA) تخلیص گردید. در نهایت پروتئین نوترکیب PAL با آزمایش وسترن بلاتینگ بررسی شد.
یافته ها
با استفاده از محیط کشت Terrific Broth، شروع القاء در جذب نوری 6/0 (طول موج 600 نانومتر)، غلظت یک میلی مولار ماده القاء کننده IPTG، دمای رشد 25 درجه سانتیگراد و مدت زمان 15 ساعت پس از القاء، بهترین بیان پروتئین PAL بدست آمد. پروتئین پری پلاسمی نوترکیب PAL با استفاده از ستون رزین NTA با خلوص بیش از 80% تخلیص گردید. نتایج آزمایش وسترن بلاتینگ نیز نشان داد که پروتئین نوترکیب PAL تخلیص شده به طور اختصاصی با آنتی بادی anti-His6-peroxidase شناسایی گردید.
نتیجه گیری
با تخلیص پروتئین PAL به میزان بیش از 80% می توان به منظور بررسی پتانسیل آن در تشخیص بیماری لژیونر و تهیه کیت تشخیصی بر اساس الایزا از آن استفاده نمود.

کلید واژگان: بهینه سازی, بیان, تخلیص, لیپوپروتئین مرتبط با پپتیدوگلیکان, لژیونلا پنوموفیلا

چکیده مشاهده متن زبان: فارسی

Optimization of gene expression and purification of Legionella pneumophila peptidoglycan associated lipoprotein recombinant protein

Abolfazl Gholipour, Seyedmojtaba Moosavian, Hamid Galehdari, Manoochehr Makvandi, Seyedali Mard, Hamid Rajabimemari, Reza Imani, Neda Soleimani, Amir Hooshang Alvandi

Journal of Shahrekord University of Medical Sciences, Volume:14 Issue: 3, 2012, PP 1 -11

Background And Aims
There are many problems with most of the available diagnostic tests used to diagnose Legionella pneumonia, including inadequate sensitivity and specificity, and inability to provide a result in a clinically useful time period. Legionella pneumophila PAL protein has been considred as a target for detecting of Legionella infection from urine specimen, because it is conserved sequence and is secreted into the urine. The aim of this study was to optimize expression and purification of L. pneumophila PAL protein.
Methods
In this experimental study, optimizing of 5 parameters (cell density, induction time, growth temperature, IPTG concentration and type of medium) was performed. After expression, periplasmic extract was prepared and recombinant PAL protein purified using Ni2+-charged resin column. Finally, recombinant PAL protein was verified by Western blotting.
Results
In terrific broth medium, the optimum condition of r-PAL protein induction was occurred at an OD600 of 0.6, 1mM IPTG concentration and 15 hours incubation at 25ºC Recombinant periplasmic PAL protein was highly purified (>80%) using Ni-NTA column. Western blotting analysis showed that recombinant PAL protein was also specifically recognized by anti-His6-peroxidase antibody.
Conclusion
By purification of recombinant PAL protein in purity greater than 80% it can be used to evaluate its capacity in diagnosis of Legionella infection and preparation of diagnostic kit.

Keywords: Optimization, Expression, Purification, Peptidoglycan associated lipoproteinLegionella pneumophila

Abstract View Paper Original: Persian

نکته

نتایج بر اساس تاریخ انتشار مرتب شده‌اند.
کلیدواژه مورد نظر شما تنها در فیلد کلیدواژگان مقالات جستجو شده‌است. به منظور حذف نتایج غیر مرتبط، جستجو تنها در مقالات مجلاتی انجام شده که با مجله ماخذ هم موضوع هستند.
در صورتی که می‌خواهید جستجو را در همه موضوعات و با شرایط دیگر تکرار کنید به صفحه جستجوی پیشرفته مجلات مراجعه کنید.

به جمع مشترکان مگیران بپیوندید!

جستجوی مقالات مرتبط با کلیدواژه "لیپوپروتئین مرتبط با پپتیدوگلیکان" در نشریات گروه "پزشکی"