جستجوی مقالات مرتبط با کلیدواژه "کلستریدیوم پرفرینجنس" در نشریات گروه "دامپزشکی"
-
پیشینه:
کلستریدیوم پرفرینجنس به طور معمول در دستگاه گوارش ساکن می باشد و قادر به بقا در شرایط مختلف محیطی است. این پاتوژن چندین توکسین پروتیینی از جمله توکسین-ε را تولید می نماید که این توکسین توسط مرکز کنترل و پیشگیری از بیماری ها (CDC) در گروه B توکسین ها طبقه بندی می شود. در چندین مطالعه مشخص گردیده است که القاء تولید توکسین در کلستریدیوم پرفرینجنس تیپC و D در اثر تماس نزدیک با سلول های شبه انتروسیت Caco-2 بسیار سریعتر اتفاق می افتد.
هدفدر این مطالعه اثر تماس نزدیک کلستریدیوم پرفرینجنس تیپ D (سویه واکسن) با سلول های شبه انتروسیت Caco-2 بر مدت زمان تولید توکسین هایε- و α- مورد بررسی قرار گرفت.
روش کاردر طی تماس نزدیک کلستریدیوم پرفرینجنس تیپ D با سلول های Caco-2 به مدت 5 ساعت، میزان بیان ژن توکسین هایε- و α-، در ساعات صفر، 2 و 5 با روش real time-PCR کمی مورد ارزیابی قرار گرفت. در این مطالعه سلول های مواجهه نشده با باکتری ها به عنوان کنترل منفی در نظر گرفته شدند.
نتایجبر اساس نتایج، تماس با سلول های انتروسیت باعث افزایش معنی دار میانگین بیان ژن توکسینε- در کلستریدیوم پرفرینجنس شد (etx) (P<0.05). در 2 ساعت پس از مواجهه، بیشترین میزان بیان این ژن در گروه مورد مطالعه مشاهده گردید. نتایج نشان داد که زمان برداشت کلستریدیوم ها، مواجهه با سلول و تقابل بین آن ها در میانگین بیان ژن توکسینα- بی تاثیر بود (cpa) (P>0.05).
نتیجه گیری:
بر اساس یافته های حاصل از مطالعه حاضر، تماس نزدیک با سلول های Caco-2 در طی 2 ساعت باعث افزایش بیان ژن ε در کلستریدیوم پرفرینجنس تیپ D (سویه واکسن) شد.
کلید واژگان: سلول های Caco-2, کلستریدیوم پرفرینجنس, بیان ژن, توکسینBackgroundClostridium perfringens commonly resides in the gastrointestinal tract and can survive in different environmental conditions. This pathogen produces several protein toxins including the potent ε-toxin which is classified as a category B toxin by the Centers for Disease Control and Prevention (CDC). In several studies, the induction of C. perfringens type C or D to produce toxins much more rapidly by close contact of bacteria with Caco-2 cells has been reported.
AimsThe effect of close contact of enterocyte-like Caco-2 cells with C. perfringens type D (vaccine strain) on the production time of ε- and α-toxins was studied.
MethodsDuring C. perfringens type D contact with Caco-2 cells for 5 h, ε- and α-toxins expressions (at 0, 2, and 5 h) were evaluated by a quantitative real-time PCR assay. Non-contacted bacteria with cells were included as the negative control in this research.
ResultsBacterial contact with the Caco-2 cells induces a significant effect on the mean expression of the ε-toxin gene (etx) (P<0.05). Two h after contact, the highest level of gene expression was detected in the experimental group. Bacterial harvesting time, cell treatment, and their interactions did not affect significantly the mean expression of the α-toxin gene (cpa) (P>0.05).
ConclusionAccording to the findings of the present study, 2 h of bacterial contact with Caco-2 cells could stimulate etx gene expression in the C. perfringens type D vaccine strain.
Keywords: Caco-2 cells, Clostridium perfringens, Gene expression, Toxin -
در اسفند ماه سال 1398، سه راس بره 5 تا 15 روزه نژاد مخلوط به بیمارستان دامپزشکی دانشگاه تهران ارجاع داده شدند. شکایت دامدار از وجود تلفات 20 درصدی (42 راس) در بره های 4 تا 17 روزه گله خود که تنها با شیر مادر تغذیه می شدند، بود. در مشاهده و معاینه بالینی، زمین گیری، افسردگی، ضعف، دمای 40 درجه سلسیوس، اتساع شیردان با مایعات، تاکی پنه، تاکیکاردی و پرخونی مخاطات ثبت گردید. بره ها پس از معاینات بالینی، تحت بررسی خو ن شناسی قرارگرفته و سپس در شرایط بهداشتی کالبدگشایی شدند. همچنین خون، مغز استخوان، مغز، ریه، قلب، کبد، کلیه، روده و شیردان مورد کشت های باکتریایی هوازی و بی هوازی قرار گرفتند. در بررسی خون شناسی، آنمی نرموسیتیک نرموکرومیک، لکوپنی، لنفوپنی، انحراف به چپ، حضور شیستوسیت، کراتوسیت، میلوسیت و متامیلوسیت مشاهده شد. در کالبدگشایی، زخم های سرسنجاقی در مخاط شیردان، حضور توده های خونی شبیه به دانه قهوه در محتویات شیردان و رنگ پریدگی کلیه ها وجود داشت. در رنگ آمیزی گرم گسترش مستقیم شیردان، تعداد زیادی باکتری میله ای شکل گرم مثبت مشاهده شد. همچنین از شیردان و روده دام های بیمار، کلستریدیوم پرفرینجنس تیپA و اشریشیا کولای غیرپاتوژن جدا گردید. مطالعه حاضر نشان داد که باکتری کلستریدیوم پرفرینجنس تیپA ممکن است در بیماری التهاب شیردان بره ها دخیل باشد.
کلید واژگان: التهاب شیردان, بره, کلستریدیوم پرفرینجنسIn March 2020, three 5-15 day old mixed breed lambs were referred to the University of Tehran Veterinary Hospital. The farmer complained of 20% mortality rate (42 heads) in 4-17 day old lambs of his flock that they were exclusively breastfed. In observation and clinical examination, recumbency, depression, weakness, 40 ° C temperature ,abomasal dilation with fluid, tachypnea, tachycardia and hyperemia of the mucosa were recorded. After clinical examination, the lambs were examined by hematology and then necropsied under sterile conditions. In hematologic examination, normocytic-normochromic anemia, leukopenia, lymphopenia, left shift, the presence of schistocytes, keratocytes, myelocytes and metamyelocytes were observed. In necropsy, there were abomasal petechiae hemorrhages, coffee grain-like blood masses in the contents of the abomasum and pale kidneys. The direct gram smear from the abomasum had a large number of positive gram rods. All organs were subjected to aerobic and anaerobic bacterial cultures. Clostridium perfringens type A and non-pathogenic E coli were isolated from the abomasum and intestine of patients. The highest antibiotic susceptibility of Clostridium perfringens A isolate was to ceftiofur and ceftriaxone antibiotics. This study showed that Clostridium perfringens A may be involved in the pathogenesis of abomasitis in lambs. . . . . . .
Keywords: Abomasum, lamb, Ulcer, Clostridium -
تیپ D کلستریدیوم پرفرینجنس، عامل بیماری حاد و کشنده ای به نام آنتروتوکسمی بوده که غالبا گوسفند و بز را درگیر می کند. هدف از این مطالعه، ارزیابی جنبه های پاتولوژی، باکتریولوژی، سرولوژی و مولکولی این بیماری در گوسفندان منطقه ی اهواز بوده است. بدین منظور در فاصله ی زمانی 23 ماهه،20 راس گوسفند مشکوک به آنتروتوکسمی، (بر پایه ی اطلاعات بالینی) به طور معمول کالبدگشایی شده و نمونه های لازم از آن ها جهت آزمایش های بعدی اخذ گردید. در 50 درصد از دام ها مرگ ناگهانی به عنوان بارزترین یافته ی بالینی گزارش شده بود. معمول ترین نشانه های آسیب شناسی مشاهده شده در حیوانات مزبور خون ریزی اندوکارد (70 درصد)، پنومونی بینابینی (65 درصد)، ادم و خون ریزی مغزی (60 درصد) و نکروز حاد لوله ای (65 درصد) بود. علاوه بر این در 50 درصد از دام های مزبور، گلوکوزاوری نیز به اثبات رسید. بررسی های معمول باکتریولوژیک بر روی محتویات روده، نشان دهنده ی جداسازی 6 جدایه مشکوک به کلستریدیوم پرفرینجنس بود که بر پایه ی یافته های PCR، 4 جدایه تیپ A و 1 جدایه از هر یک از تیپ های C و D بودند. تشخیص توکسین در محتویات روده با استفاده از آزمون الایزای غیرمستقیم صورت پذیرفت که نتایج آن با یافته های PCR هم خوانی داشت. با فرض ضایعات مغزی و گلوکوزاوری به عنوان شاخص آنتروتوکسمی تیپ D، وقوع آنتروتوکسمی در حداقل 50 درصد نمونه ها مورد گمان است که البته با یافته های دیگر آزمون ها، هم خوانی نداشت. یافته های این مطالعه نشان دهنده ی اهمیت تازه بودن نمونه ها در نتایج آزمون های قابل استفاده برای ردیابی کلستریدیوم پرفرینجنس و توکسین های آن، است. همچنین با توجه به سابقه ی واکسیناسیون در اغلب حیوانات مورد مطالعه، رعایت اصول واکسیناسیون در دامداری های محلی مورد تردید است.کلید واژگان: آنتروتوکسمی, کلستریدیوم پرفرینجنس, الایزا, PCR, پاتولوژیClostridium perfringens type D is the cause of an acute and fatal disease; called enterotoxemia which mostly infects sheep and goats. This study aimed to evaluate the pathological, bacteriological, serological and molecular aspects of this disease in sheep in city of Ahvaz. During 23 months, 20 suspected sheep (based on clinical history) were taken for routine necropsy and required specimens were prepared for complementary studies. In 50% of the cases, sudden death was reported as the most obvious clinical finding. The most common pathological lesions were endocardial hemorrhage (70%) interstitial pneumonia (65%) brain haemorrhage and edema (60%) and acute tubular necrosis (65%). Moreover, in 50% of the cases, glucosuria was also noted. The conventional bacteriological methods on the intestinal content showed 6 suspected strains of C. perfringens which in the PCR method, four were identified as type A and two as type C and D, (each one). The toxin detection in the intestinal content was performed using indirect Elisa test the results of which were consistent with PCR findings. Assuming the brain lesions and glucosuria as indicators of type D enterotoxemia, the disease was suspected at least 50% of the cases, which however didn’t match with finding of the other tests, so it needs to be studied more. The findings of the present study revealed the importance of freshness of samples in the results of tests that can be used to trace C. perfringens and their toxins. Furthermore, considering the history of vaccination in most of the animals studied, the principles of vaccination in local farms are questionable.Keywords: Enterotoxemia, Clostridium perfringens, Elisa. PCR, Pathology
-
در این مطالعه کلستریدیوم پرفرینجنس تیپ A فاقد ژن انتروتوکسین از موارد آنتریت نکروتیک در یک مینا ، یک کبک خاکستری و یک بوقلمون با علایم درمانگاهی مشخصه بیماری آنتریت از شهریور 1390 تا آبان 1392 مورد بررسی و تعیین هویت قرار گرفت. پرندگان مبتلا دارای علایمی چون بی اشتهایی و اسهال بودند. ضایعات ماکروسکپی و میکروسکپی نشان دهنده آنتریت نکروتیک حاد بود. کلستریدیوم پرفرینجنس بصورت خالص از ضایعات روده جداسازی شد و بر اساس تست PCR چندگانه مشخص گردید جدایه ها همگی تیپ A و دارای ژن های حدت cpb2 و cpa و فاقد ژن حدت net B بودند.
کلید واژگان: مینا, کبک خاکستری بوقلمون, کلستریدیوم پرفرینجنس, cpb2, cpaIranian Journal of Veterinary Science and Technology, Volume:9 Issue: 2, Summer and Autumn 2017, PP 64 -69A nonenterotoxin (CPE)producing Clostridium perfringens type A, associated with enteritis in a mynah (Acridotheres tristis), a grey partridge (Perdix perdix) and a turkey (Meleagris gallopavo) was characterized from cases with clinical symptoms from September 2010 until October 2012. Affected birds exhibited anorexia and diarrhea. Gross and histological findings were indicative of acute necrotic enteritis. Clostridium perfringens was isolated in bacterial cultures. Multiplex PCR for toxin profiling of the isolates revealed that the all three isolates were Clostridium perfringens type A, positive for cpb2 and cpa.
Keywords: Mynah (Acridotheres tristis), Grey Partridge (Perdix perdix), Turkey (Meleagris gallopavo), Clostridium perfringens, cpb2, cpa -
کلستریدیوم پرفرینجنس باکتری پاتوژن مهمی است که باعث بیماری های مختلفی در دام ها می-شود. این باکتری در 5 تیپ A، B، C، D و E طبقه بندی می شود. تیپ D کلستریدیوم پرفرینجنس عامل ایجاد بیماری آنتروتوکسمی در دام ها است. هدف از این مطالعه تعیین تیپ-های مختلف کلستریدیوم پرفرینجنس در منطقه ی اهواز بود. 369 نمونه مدفوع به صورت تصادفی از گوسفندان این منطقه، جمع آوری گردید. پس از آماده سازی و کشت نمونه ها در محیط آگار خون دار حاوی نئومایسین، باکتری های مظنون به کلستریدیوم پرفرینجنس با استفاده از روش های مورفولوژیکی و بیوشیمیایی تعیین هویت شدند. درمجموع از 369 نمونه مدفوع جمع آوری شده، با استفاده از روش های مورفولوژیکی و بیوشیمیایی، تعداد 56 جدایه مظنون به کلستریدیوم پرفرینجنس جداسازی و شناسایی گردید. برای تایید مولکولی جدایه ها، DNA این جدایه ها استخراج و با استفاده از پرایمر های اختصاصی توکسین آلفا، تایید مولکولی جدایه ها با PCR صورت گرفت. نتایج نشان داد که از 56 جدایه کلستریدیوم پرفرینجنس، 54 جدایه به عنوان کلستریدیوم پرفرینجنستایید ملکولی شدند. تعیین تیپ این جدایه ها با استفاده از پرایمرهای اختصاصی اگزوتوکسین های پنج گانه ی تیپ های مختلف این باکتری صورت پذیرفت. نتایج نشان داد که از مجموع 54 جدایه، به ترتیب 10 (52/18%)، 4 (41/7%)، 24 (44/44%) و 16جدایه (63/29%)، تیپA، تیپB، تیپC و تیپD می باشند. بنابراین شایع ترین تیپ های این باکتری در این منطقه تیپ های C وD هستند. در این مطالعه، هیچ یک از جدایه ها واجد ژن توکسین یوتا و نیز ژن آنتروتوکسین نبودند.کلید واژگان: کلستریدیوم پرفرینجنس, ژنوتیپ, PCR, گوسفند, اهوازClostridium perfringens is an important pathogen which causes numerous different ýdiseases in animals. This bacterium is classified into five different types; A, B, C, ýD and E. Clostridium perfringens type D cause entrotoxemia in animals.ý
The aim of this study was to identify different types of Clostridium perfringens in ýsheep in Ahvaz. For this purpose 369 fecal samples were randomly collected from ýthe sheep from different area. After processing and culturing samples in blood ýagar containing neomycin, Clostridium perfringens suspected isolates were ýidentified morphologically and biochemically. According to biochemical tests, ýfrom 369 feces samples, 56 isolates obtained and identified as Clostridium ýperfringens. For molecular confirmation of the isolate, the DNA of the isolates ýwas extracted and the isolates were verified as Clostridium perfringens by PCR ýusing specific primers for alfa toxin. The results showed that 54 isolated from 56 ýisolated confirmed as Clostridium perfringens. Typing of these isolates was done ýby PCR using specific primers for 5 different exotoxins of this bacterium. The ýresults showed that 10 isolates (18/51%) were type A and 4 (7/4%), 24 (44/44%) ýand 16 isolates (29/62%) were type B, type C and type D respectively. Thus the ýmost prevalent types of Clostridium perfringens were type C and D. In the present ýstudy, all isolates were negative for iota toxin and enterotoxin gene. ýKeywords: Clostridium perfringens, Genotype, PCR, Sheep, Ahvaz -
The aim of this study was to evaluate the anti-bacterial effect of 13 common and costly kinds of the standard antibiotics and the aqueous extracts of Berberis, Onions and Garlic on Clostridium perfrigenes isolates from cases of necrotic enteritis of breeding Turkeys. For this purpose, in addition to the Antibiogram tests using with those antibiotics on 40 isolates of Clostridium perfringens of breeding Turkeys with necrotic enteritis, as well as the susceptibility of isolates was tested in the presence of aqueous extracts of barberry, onions and garlic too. Results were confirmed that majority of isolates were sensitive to the antibiotics of Chloramphenicol, Vancomycin, Sulfamethoxazole亸ꙺ�ꚸ and aqueous extracts of Barberry and Onions; as well as were resistance to the antibiotics of Tetracycline, Penicilline, Neomycin sulfate and aqueous extracts of Garlic. In this regard, the most effective on tested isolates for the extracts of barberry and the lowest anti-clostridial impact was recorded related to the antibiotic of Tetracycline that statistically; with the effects of all tested antibiotics and extracts were showed significant difference (pKeywords: Clostridium perfrigenes, antibiotic, aqueous extracts, antibacterial effect
-
کلستریدیوم پرفرینجنس یک عامل ایجاد اسهال در سگ ها می باشد. هدف از این تحقیق جداسازی کلستریدیوم پرفرینجنس به روش های کشت باکتری و مولکولی تایپینگ توکسین می باشد. در این مطالعه از 151 قلاده سگ درمنطقه شمال شرق کشور، استان خراسان رضوی نمونه های مدفوع جمع‌آوری شد، که 131 قلاده سگ در معاینه بالینی سالم و 20 قلاده سگ دیگر دارای اسهال بودند. نمونه های مدفوع روی محیط بلاد آگار 5% کشت داده شدند، کلونی های مشکوک به همولیز دابل با استفاده از روش واکنش زنجیره ای پلیمراز منفرد و چندتایی به منظور تشخیص تایپینگ توکسین ایزوله ها با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ارزیابی شدند. گونه‌های کلستریدیوم پرفرینجنس جدا شده از 5 قلاده سگ از مجموع 20 قلاده سگ دارای اسهال (25%) و 31 قلاده سگ از مجموع 131 قلاده سگ غیراسهالی (8/23%) جدا شدند. همه این ایزوله ها (36 قلاده سگ از مجموع 151 قلاده سگ) جزو کلستریدیوم تیپ A (cpa+) طبقه بندی شدند. 14 ایزوله (8/38%) دارای پروفایل cpa+cpb2+netB-tpeL- و یک ایزوله (8/2%) دارای پروفایل توکسینی cpa+cpe+netB-tpeL- بود. مطالعات بیشتری مورد نیاز می باشد تا اپیدمیولوژی کلستریدیوم پرفرینجنس در سگها، نقش آن به عنوان یک عامل مشترک و تهدید کننده سلامت عمومی بررسی شود. براساس دانش نویسنده، این مطالعه اولین مطالعه ای می یاشد که طی آن جداسازی و ژنوتایپینگ کلستریدیوم پرفرینجنس از سگ ها در ایران انجام شد. در این مطالعه جداسازی ژن cpa+cpe+ برای اولین بار از کلستریدیوم پرفرینجنس در سگ های سالم نیز گزارش شد.
کلید واژگان: جداسازی, ژنوتایپینگ, کلستریدیوم پرفرینجنس, سگIranian Journal of Veterinary Science and Technology, Volume:8 Issue: 2, Summer and Autumn 2016, PP 48 -54Clostridium perfringens has been known as a cause of diarrhoea in dogs. The aim of this research was isolation C. perfringens by culturing and toxinotyping by PCR molecular method. In this research 151 dogs faecal samples were collected from northwest of Iran, 131 of which were apparently healthy, and 20 of which were diarrheic. These faecal samples were cultured on 5% sheep blood agar; the suspected colonies with double homolysis that using multiplex and single polymerase chain reaction (PCR) assay were admitted to detect toxinotypes of the isolates by specific primers. C. perfringens strains were isolated from 5/20 (25%) the diarrheic group and 31/131(23.8%) the non-diarrheic group. All isolates (36/151) were classified as C. perfringens type A (cpa). Fourteen isolates (38.8%) with cpatpeL- profile and one isolate (2.8%) had cpatpeL- toxins profile. More studies are needed to elucidate the epidemiology of C. perfringens in dogs and its role as a zoonotic agent and public health hazard. Based on authors knowledge, this is the first study was performed in order to isolation C. perfringens and genotyping from dogs in Iran. The cpa gene was reported from one C. perfringens isolated from healthy dogs.
Keywords: Isolation, Genotyping, Closteridium Perfringens, Dog -
کلستریدیوم پرفرینجنس، یک بیماری زای مهم بوده که در حیوانات اهلی، بیماری های گوارشی و در انسان مسمومیت غذایی ایجاد می کند. اسپورها طی فرآیند پخت زنده مانده و نقش مهمی در شروع احتمالی بیماری ایفا می کنند. در این مطالعه RAPD-PCR و REP-PCR برای بررسی تنوع ژنتیکی 49 ایزوله کلستریدیوم پرفرینجنس تیپ A از سه منشا مختلف استفاده شدند. نتایج RAPD-PCR، بیشترین تنوع را در بین ایزوله های مرغی نشان داد در حالی که ایزوله های انسانی کمترین تنوع را نشان دادند. آنالیز گروه بندی به دست آمده از RAPD-PCR و بر اساس فاصله های ژنتیکی، 49 ایزوله را به 5 گروه اصلی A)، B، C، D و (E تقسیم نمود. گروه های A و C از ایزوله های گوشت مرغ، گروه B از ایزوله های مدفوع انسانی، گروه D از ایزوله های گوشت چرخ کرده، گوشت مرغ و مدفوع انسان و گروه E از ایزوله های گوشت چرخ کرده تشکیل شدند. شناسایی بیشتر این سویه ها به وسیله آنالیز انگشت نگاری (GTG) 5 بر اساس توالی های تکرار شده، تمایز بیشتری میان انواع مختلف سویه ها نشان نداد. به عنوان نتیجه گیری می توان گفت که RAPD-PCR روشی مناسب به منظور یافتن منشا آلودگی در زمینه بهداشت و صنعت مواد غذایی می باشد.کلید واژگان: کلستریدیوم پرفرینجنس, تنوع ژنتیکی, RAPD, PCR, REP, PCRClostridium perfringens is a serious pathogen which causes enteric diseases in domestic animals and food poisoning in humans. Spores can survive cooking processes and play an important role in the possible onset of disease. In this study, RAPD-PCR and REPPCR were used to examine the genetic diversity of 49 isolates of C. perfringens type A from three different sources. The results of RAPD-PCR revealed the most genetic diversity among poultry isolates, while human isolates showed the least genetic diversity. Cluster analysis obtained from RAPD-PCR and based on the genetic distances split the 49 strains into five distinct major clusters (A, B, C, D, and E). Cluster A and C were composed of isolates from poultry meat, cluster B was composed of isolates from human stool, cluster D was composed of isolates from minced meat, poultry meat and human stool and cluster E was composed of isolates from minced meat. Further characterization of these strains by using (GTG) 5 fingerprint repetitive sequence-based PCR analysis did not show further differentiation between various types of strains. In conclusion, RAPD-PCR method seems to be very promising for contamination source tracking in the field of food hygiene.Keywords: Clostridium perfringens, Genetic diversity, RAPD, PCR, REP, PCR
-
واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) یک روش مناسب برای شناسایی عوامل بیماری زا محسوب می شود و جداسازی DNA اولین گام در این مسیر است. استخراج DNA یک مرحله وقت گیر در تحقیقات ژنتیک مولکولی به شمار می آید که در بعضی موارد از کل مراحل انجام PCR طولانی تر است. هدف از انجام این تحقیق، استفاده از PCR مستقیم (بدون استخراج DNA) جهت تعیین تیپ های مختلف باکتری کلستریدیوم پرفرینجنس می باشد. در این تحقیق PCR مستقیم و همچنین PCR با DNA استخراج شده بر روی چهار تیپ A، B، C و D باکتری کلستریدیوم پرفرینجنس انجام شد، که برای این هدف از چهار جفت پرایمر اختصاصی که مکمل بخش هایی از ژن های کد کننده توکسین های آلفا، بتا، اپسیلون و یوتای این باکتری بودند استفاده گردید. در هر دو روش PCR مستقیم و PCR با DNA استخراج شده، قطعات 196، 324 و 655 جفت بازی سنتز گردید که به ترتیب مربوط به توکسین آلفا، بتا و اپسیلون می باشند. در نهایت براساس طول قطعات سنتز شده در PCR، تیپ های مختلف این باکتری تشخیص داده شدند. نتایج این تحقیق نشان می دهد که انجام PCR به طور مستقیم از کلونی بسیار ساده است و کیفیت باند ایجاد شده در PCR مستقیم و PCR با DNA استخراج شده با هم تفاوتی ندارند. بنابراین با توجه به اینکه استفاده از PCR مستقیم زمان، مراحل و هزینه PCR را کاهش می دهد و امکان آزمون تعداد زیادی نمونه را در زمان کوتاهتری فراهم می آورد، استفاده از این روش توصیه می گردد.
کلید واژگان: کلستریدیوم پرفرینجنس, استخراج DNA, PCR مستقیمPolymerase chain reaction (PCR) is a suitable method for detecting pathogenic agents and first step in this process is DNA extraction. DNA extraction enumerate as a long stage in molecular genetic researches that is longer than total PCR process in some cases. The aim of this research is use of direct PCR (without DNA extraction) for different typing of Clostridium perfringens. In this study direct PCR and also PCR by extracted DNA was implemented on the A, B, C and D types of Clostridium perfringens. For this purpose four pairs of specific primers that were complementary with parts of the genes encoding α, β, ε and ι toxins of this bacterium were used. In both direct PCR and PCR by extracted DNA, 19, 324 and 655 bp fragments were amplified that are dependent to α, β and ε toxins respectively. Upshot different strains of this bacterium were identified based on amplified fragment length in PCR. The result showed that success of PCR is simple from colony directly and quality of created bands is the same in both methods. Therefore, use of this method is recommended because the direct PCR reduce time, steps and cost of PCR and provide possibility of testing many samples in shorter times provides.Keywords: Clostridium perfringens, DNA extraction, Direct PCR -
طراحی و تولید صحیح و مناسب یک ساختار فیوژن؛ از مهمترین مشکلات در زمینه تولید مقادیر زیاد پروتئین های فانکشنال برخوردار از پیچ خوردگی های مناسب است. چنین ساختاری باید دارای کلیه اجزاء مورد نیاز یک ژن واقعی باشد. در صورتیکه ساختار فیوژن به خوبی طراحی شده باشد، می توان آن را در داخل یک میزبان مناسب کلون کرد. کلستریدیوم پرفرینجنز از عوامل مهم بیماری زای انسان و دام بوده و تعداد زیادی توکسین از جمله اپسیلون و بتا که مسئول بیماری های شدیدی هستند را تولید میکند. در مطالعه حاضر یک ساختار جدید شامل partial cds ژن توکسین اپسیلون کلستریدیوم پرفرینجنز تیپ D و partial cds ژن توکسین بتا کلستریدیوم پرفرینجنز تیپ B طراحی شد. در اولین مرحله این ژن ها با استفاده از دو جفت پرایمر آمپلیفای شده و در مرحله دوم با استفاده از پرایمرهای اپسیلون فوروارد و بتا ریورس و با بکار گرفتن قطعه AEAAAKEAAAKAبه عنوان لینکر با یکدیگر فیوز شدند. این کار بر مبنای روش fusion PCR وبا استفاده از آنزیم DNA Pfu پلیمراز که قابلیت تصحیح خطا را دارد انجام شد. قطعه فیوژن پس از اینزرت شدن در پلاسمید pJET1.2blunt در باکتری E.coli سویه TOP10 کلون شد. براساس آخرین اطلاعات موجود این مقاله اولین گزارش در خصوص طراحی و کلونینگ فیوژن ژن اپسیلون- بتا و اولین گزارش در مورد استفاده از استراتژی فیوژن واکنش زنجیره ای پلیمراز در کلستریدیا است که می تواند برای توسعه و تکوین یک واکسن نوترکیب از فیوژن پروتئین اپسیلون-بتا استفاده شود. همچنین این ساختار می تواند به عنوان مدلی برای توسعه و تکوین ساختار های جدید فیوژن پروتئین برای سایر پروتئین ها و توکسین های بالقوه نیز بکار گرفته شود.
کلید واژگان: کلستریدیوم پرفرینجنس, توکسین اپسیلون, بتاتوکسین, کلونینگ, فیوژن واکنش زنجیره ای پلیمرازDesigning and producing a proper fusion construction is the most important problem of producing large quantities of a properly folded functional protein. This construction should have all necessary components of a real gene. A good designed fusion gene construction could be cloned into a good and suitable host. Clostridium perfringens is an important pathogen of humans and livestock and produces numerous toxins including epsilon and beta which are responsible for severe diseases. In the present study a new construction containing Clostridium perfringens type D epsilon toxin gene and type B beta toxin gene was designed. At the first step two pairs of primers were used for these genes amplification. At the next step epsilon forward and beta reveres primers were used to produce a chimeric gene containing amplified partial cds of etxD and partial cds of cpbB which are linked together by the AEAAAKEAAAKA fragment as a small linker. The method was based on fusion PCR and using of Pfu DNA polymerase, which has a proofreading activity. The fusion gene inserted into pJET1.2blunt and cloned into E.coli strain TOP10. Based on the latest information, this is the first design and cloning of epsilon-beta fusion gene and also this is the first time that PCR fusion strategy is used for Clostriadial gene fusion, which could be used for development of a recombinant epsilon-beta fusion protein vaccine. This construction also could serve as a model for development and production of novel fusion protein for other potential proteins and toxins.Keywords: Clostridium perfringens, epsilon toxin, beta toxin, cloning, fusion PCR -
با بهره گیری از عوامل و شرایط مستعد کننده مختلف، تعداد 525 قطعه جوجه گوشتی در 6 آزمایش تجربی متفاوت، مورد استفاده قرار گرفتند تا سیستم چالش پایداری برای ایجاد تجربی بیماری آنتریت نکروتیک ایجاد گردد. در 4 آزمایش اول علی رغم تامین نسبی شرایط مستعد کننده و چالش جوجه ها با مخلوط کشت 4 جدایه کلستریدیوم پرفرینژنس از موارد حاد بیماری، نتیجه موفقیت آمیز نبود. در آزمایش های 5 و 6 پس از گسترش شرایط مستعد کننده مناسب، با تجویز 3 میلی لیتر از محلول حاوی cfu/ml*3 از باکتری به روش داخل دهانی و مخلوط با دان مصرفی در سن 17 روزگی به مدت 5 روز و هر روز 2 نوبت، تلفات ونشانه های بالینی بیماری در پرندگان چالش شده مشاهده شد. این مطالعه مشخص نمود که با ایجاد شرایط استرس زای مدیریتی و تغذیه ای (مانند افزایش تراکم و مقادیر بالای گندم و پودر ماهی)، تضعیف نسبی سیستم ایمنی، روش تکثیر مناسب و غلظت کافی باکتری و استفاده از سوش های جدا شده از موارد حاد بیماری، می توان بیماری را به صورت تجربی ایجاد نمودکلید واژگان: آنتریت نکروتیک, کلستریدیوم پرفرینجنس, بیماری تجربی, جوجه گوشتیTo establish an stable challenge system for induction of necrotic enteritis (NE) in broiler chickens, different potential factors and predisposing conditions were imposed in 6 separate different experiments using 525 day-old chicks in total. Despite the presence of some predisposing factors and using 4 isolates of Clostridium perfringens (CP) from acute and severe NE outbreaks as challenge bacteria, the disease was not successfully reproduced in the first 4 experiments. In the 5th and 6th experiments, the predisposing conditions were changed and each bird was challenged with 3 ml (3×108 CFU/ml) of CP live culture via oral route and also the feed mixed with CP suspension 2 times per day and for 5 consecutive days. Clinical signs and mortalities, and lesions associated with NE were observed in the later two experiments. This study showed that by stressful nutritional and management procedures such as increased stocking density and high levels of wheat and fish meal; induction of relative immunosuppression; using sufficient CP concentration and appropriate ways of its multiplication; and applying challenge bacteria isolated from acute outbreaks, NE may be experimentally induced in broiler chickens.
-
در مطالعه حاضر پس از جداسازی 40 جدایه کلستریدیوم پرفرینجنس از گله های گوشتی مبتلا، با انجام آزمایش آنتی بیوگرام مشخص گردید که این 40 جدایه از موارد بالینی، 39 الگوی مقاومت دارویی را نشان دادند که 95% جدایه ها در 38 الگوی مقاومت داروئی مختلف (یک جدایه در هر الگو) و تنها 5% جدایه ها در یک الگوی مقاومت داروئی (2 جدایه در الگو) قرار داشتند. تمامی 40 جدایه کلستریدیوم پرفرینجنس در این بررسی به کلرامفنیکل، ونکومایسین و سولفامتوکسازول+ تری متوپریم، مقاومتی از صفر تا 5/17% نشان دادند، در حالی که ضد باکتری های تتراسایکلین، لینکومایسین و نئومایسین سولفات مقاومت داروئی بالا از 80 تا 5/87% را داشتند. در این آزمایش همچنین یک جدایه مقاومت چندگانه ای به بیش از 14 ترکیب ضد باکتریایی نشان داد.کلید واژگان: کلستریدیوم پرفرینجنس, الگوی مقاومت دارویی, طیور گوشتی, آنتریت نکروتیکIn this study, after separating 40 Clostridium perfringens isolates from affected broiler flocks, the antibacterial susceptibility test revealed 39 drug resistance patterns in which 95% of the isolates were distributed into 38 different patterns (one isolate in each pattern) and only 5% of the isolates were placed in a single pattern (two isolates in a pattern). All 40 Clostridium perfringens isolates demonstrated resistance to chloramphenicol, vancomycin and sulfamethoxazole뚸ꙺ�ꚸ, ranging from 0 to 17.5% while tetracycline, lincomycin and neomycin sulfate had a high level of resistance from 80 to 87.5%. Also an isolate demonstrated multiple resistance to more than 14 antibacterial compounds.Keywords: Clostridium perfringens, drug resistance patterns, Broiler chicken, necrotic enteritis
- نتایج بر اساس تاریخ انتشار مرتب شده‌اند.
- کلیدواژه مورد نظر شما تنها در فیلد کلیدواژگان مقالات جستجو شده‌است. به منظور حذف نتایج غیر مرتبط، جستجو تنها در مقالات مجلاتی انجام شده که با مجله ماخذ هم موضوع هستند.
- در صورتی که می‌خواهید جستجو را در همه موضوعات و با شرایط دیگر تکرار کنید به صفحه جستجوی پیشرفته مجلات مراجعه کنید.
©2000-2025 magiran.com All Rights Reserved.