جستجوی مقالات مرتبط با کلیدواژه « c type lectin recombinant protein » در نشریات گروه « دامپزشکی »

انتخاب همه

بهینه سازی بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب لکتین نوع سی انگل توکسوکارا کنیس در باکتری اشریشیا کلای سویه BL21(DE3)

مهسا شه بخش، فاطمه جالوسیان*، سیدحسین حسینی، پرویز شایان، عبدالرضا ناصر مقدسی

مجله تحقیقات دامپزشکی، سال هفتاد و ششم شماره 2 (تابستان 1400)، صص 162 -170

زمینه مطالعه

توکسوکاریازیس یک بیماری مهم زیونوز است که توسط نوزاد مرحله دوم توکسوکارا کنیس و توکسوکارا کتی ایجاد می شود. در خیلی از کشورهای معتدل توکسوکاریازیس رایج ترین عفونت کرمی است و سبب بروز عوارض شدید می شود. لکتین نوع سی از محصولات تولیدی در مرحله نوزادی این انگل است. این پروتئین در واکنش های ایمنی ازجمله ارسال سیگنال سلول های ایمنی در مهره داران، فعال کردن ایمنی ذاتی در مهره داران و بی مهرگان و القا هموستاز دخالت دارد.

هدف

مطالعه حاضر با هدف بهینه سازی تولید پروتئین نوترکیب لکتین نوع سی انگل توکسوکارا کنیس و بررسی خواص آنتی ژنی (پادگنی) آن صورت گرفته است.

روش‎کار:

توالی نوکلیوتیدی مرجع مربوط به لکتین نوع سی(CTL) انگل توکسوکارا کنیس از بانک ژن استخراج شد. سپس پلاسمید pET32a حاوی توالی مورد نظر توسط شرکت GENERAY سنتز گردید. پلاسمید نوترکیب به باکتری اشریشیا کلای سویه BL21(DE3) منتقل شد. بیان این پروتئین با استفاده از روش های SDS-PAGE و دات بلات بررسی و با سرم انسانی مثبت، مورد تایید قرار گرفت.

نتایج

مطالعه حاضر نشان داد که بهینه سازی شرایط برای دستیابی به بیشترین میزان تولید پروتئین با انتخاب باکتری اشریشیا کلای سویه BL21(DE3)، دمای 37 درجه سانتی گراد پس از القا و غلظت 1 میلی مولارIPTG حاصل گردید. پس از بهینه سازی پروتئین نوترکیب با غلظت 6/0±1160میکروگرم بر میلی لیتر استخراج شد. وزن مولکولی پروتئین حاصل 42 کیلودالتون بود. پاساژ پلاسمید نوترکیب قبل از القا، در باکتری اشریشیا کلای سویه DH5α باعث افزایش معنی دار بیان پروتئین گردید. نتایج ارزیابی بهینه سازی شرایط، با روش های SDS-PAGE و دات بلات نشان داد که بیشترین میزان تولید پروتئین نوترکیب لکتین نوع سی انگل توکسوکارا کنیس در شرایط بهینه سازی حاصل شده است.

نتیجه گیری نهایی:

جهت تولید هر پروتئین نوترکیب به ویژه در مقادیر زیاد و به منظور مصارف تجاری لازم است که بهینه سازی مخصوص آن پروتئین، انجام شود و دقیقا براساس شرایط بهینه سازی تعیین شده، تولید پروتئین نوترکیب قابل انجام است. نتایج مطالعه حاضر نشان داد که شرایط بهینه جهت تولید پروتئین نوترکیب لکتین نوع سی، انتخاب باکتری اشریشیا کلای سویه BL21(DE3)، دمای 37 درجه سانتی گراد و مدت زمان 4 ساعت پس از القا است که با حفظ ویژگی های ایمنی زایی نیز همراه است. به طورکلی می توان چنین نتیجه گیری کرد که سویه باکتری انتخاب شده و همچنین دما و زمان القا بر میزان بیان و تولید پروتئین های نوترکیب مانند لکتین نوع سی انگل توکسوکارا کنیس تاثیر مستقیم دارد.

کلید واژگان: توکسوکارا کنیس, پروتئین نوترکیب لکتین نوع سی, باکتری اشریشیا کلای سویه BL21(DE3), باکتری اشریشیا کلای سویه BL21, پلاسمید pET32a}

چکیده مشاهده متن مقاله پژوهشی/اصیل زبان: فارسی

Optimization of Expression and Extraction of Toxocara canis Recombinant C-Type Lectin Protein in Escherichia coli BL21 (DE3)

Mahsa Shahbakhsh, Fateme Jalousian *, Seyed Hossein Hosseini, Parviz Shayan, Abdorreza Naser Moghadasi

Journal of Veterinary Research, Volume:76 Issue: 2, 2021, PP 162 -170

BACKGROUND

Toxocaiasis is an important zoonotic disease caused by the second stage larvae of Toxocara canis and Toxocara cati. Toxocariasis is the most common worm infection in several temperate countries and causes severe complications. C-type lectin is one of the larval stage products of this parasite. It is involved in immune responses, including cellular signals in vertebrate immunity, activation of innate immunity in vertebrates and non-vertebrates, and induction of homeostasis.

OBJECTIVES

The current research aimed to optimize the production of recombinant C-type lectin of Toxocara canis and investigate its antigenic properties.

METHODS

Reference nucleotide sequence of lectin type C (CTL) of Toxocara canis (T. canis) was extracted from Genbank. Recombinant Plasmid, pET32a, including the desired sequence was then constructed by GENERAY. The recombinant plasmid was transformed to Escherichia coli strain BL21 (DE3). The expression of the recombinant protein was investigated using SDS-PAGE and dot blot methods and approved with human T. canis positive serum.

RESULTS

The findings of the present study showed that optimization and high level production of recombinant protein expression was achieved by selecting Escherichia coli (BL21 (DE3), 37 °C temperature for 4 hours after induction and 1 mM IPTG concentration. After optimization, the recombinant protein was obtained at a concentration of 1160±0.6 µg/mL. The molecular weight of the resulting recombinant protein was 42 kDa. Recombinant plasmid passage in Escherichia coli DH5α strain caused a significant increase in recombinant protein expression. The results of condition optimization evaluation, with SDS-PAGE and Dot blot methods, showed that the highest production of recombinant C type lectin protein of T. canis was obtained under optimized conditions.

CONCLUSIONS

Based on these results, to produce reasonable amounts of specific C-type lectin recombinant protein, further studies are needed to evaluate its immunogenicity and protection against Toxocara canis infection.

Keywords: Toxocara canis, C type Lectin recombinant protein, Escherichia coli BL21 (DE3), Escherichia coli BL21, pET32a Plasmid}

Abstract View Paper Research/Original Article Original: Persian

نکته

نتایج بر اساس تاریخ انتشار مرتب شده‌اند.
کلیدواژه مورد نظر شما تنها در فیلد کلیدواژگان مقالات جستجو شده‌است. به منظور حذف نتایج غیر مرتبط، جستجو تنها در مقالات مجلاتی انجام شده که با مجله ماخذ هم موضوع هستند.
در صورتی که می‌خواهید جستجو را در همه موضوعات و با شرایط دیگر تکرار کنید به صفحه جستجوی پیشرفته مجلات مراجعه کنید.

به جمع مشترکان مگیران بپیوندید!

جستجوی مقالات مرتبط با کلیدواژه « c type lectin recombinant protein » در نشریات گروه « دامپزشکی »