کشت یاخته های شناور هلا برای تولید آنتی ژنهای ویروسی

راه اندازی کشت یاخته های هلا به منظور تولید آنتی ژنهای ویروسی یاخته های پایدار هلا (HeLa) ابتدا به صورت تک لایه کشت و سپس به ظروفی که برای کشت یاخته های شناور طراحی شده بود انتقال داده شدند. برای رشد یاخته ها از محیطMinimum Essential Medium (MEM) که حاوی ده درصد سرم استریل گوساله بود استفاده شد. برای دستیابی به بهترین شرایط رشد یاخته ها، از بافر HEPES و برای حذف کلسیم، از کوبرکسی متیل سلولز (CMC) و اتیلن دی آمین تترااستیک اسید (EDTA) استفاده شد. پس از عادات دادن یاخته ها به کشت شناور، از آنها برای تکثیر ویروسهای پولیوتیپ 1، 2، 3 و ویروس آدنوتیپ 5 استفاده شد و نتایج بدست آمده با آنچه از کشت یاخته های تک لایه به دست آمده بود مقایسه شد.
زمان دو برابر شدن یاخته های هلا در کشت تک لایه و کشت شناور با اپتیمم تعداد یاخته هایی که برای شروع کار مورد استفاده قرار می گیرد ارتباط ویژه ای دارد. بهترین تعداد برای کشت این یاخته ها در پلیتهای 96 خانه ای استفاده از 300000 یاخته در یک میلی لیتر محیط کشت، و برای کشت معلق استفاده از 400000 در هر میلی لیتر محیط است. زمان دو برابر شدن برای کشت تک لایه حدود 38 ساعت بود و تا 80 ساعت بعد از شروع کشت، یاخته ها در فاز لگاریتمی تکثیر قرار داشتند، ولی فاز لگاریتمی تکثیر برای تکثیر یاخته های معلق حداکثر 48 ساعت بود. هر دو کشت یاخته ها توانستند شرایط لازم را برای تکثیر ویروسهای پولیو و آدنو 5 فراهم کنند.
برای دستیابی به کشت یاخته های شناور هلا لازم است تا غلظت یون کلسیم تا 8/3 برابر کاهش یابد، محیط کشت حاوی یاخته ها 70 بار در دقیقه چرخانده و هوادهی مناسب انجام می شود، ولی به وجود CMC احتیاجی نیست. توانایی تکثیر ویروسهای پولیوتیپ 1، 2، 3 و ویروس آدنوتیپ 5 در یاخته های تک لایه و معلق هلا یکسان است.