کلونینگ و بیان موقت ژن محافظت کننده سلولی، HO-1، در سلول های بنیادی مزانشیمال از طریق سیستم بیانی آدنوویروس بر مبنای تکنولوژی Gateway

HO-1 (هم اکسیژناز-1) یکی از عوامل قدرتمند محافظت کننده سلولی می باشد. هدف از این مطالعه، کلونینگ و بیان موقت ژن HO-1 انسانی در سلول های بنیادی مزانشیمال(MSC ها) با استفاده از سیستم بیانی آدنوویروسی برمبنای تکنولوژی Gateway بود.
در یک مطالعه تجربی، به منظور القای HO-1، رده سلولی 549 A به مدت 1 ساعت با اشعه UV مواجه گردید. cDNA توتال HO-1 جداسازی شد و از طریق واکنش کلونینگ TOPO به وکتور pENTR TOPO/D کلون گردید. برای ایجاد کلون بیانی، واکنش نوترکیبی LR بین کلون اولیه و وکتور مقصد(pAd/CMV/V5-DEST) به انجام رسید. ویروس نوترکیب در رده سلولی یوکاریوتی مناسب تشکیل شد. MSC ها به وسیله ویروس نوترکیب بیان کننده HO-1 آلوده سازی شدند.
نتایج نشان داد که HO-1 انسانی نوترکیب با موفقیت کلون شده و صحت و قرار گرفتن ژن در قالب صحیح درون وکتور به وسیله تعیین توالی DNA تایید شد. بیان HO-1 در MSC ها به وسیله آنالیز RT-PCR و وسترن بلات تایید گردید. این نتایج حاکی از این بود که بیان HO-1 موقت است.
بیان موقت ژن HO-1 انسانی در MSC ها با استفاده از سیستم بیانی آدنوویروسی، ممکن است یک استراتژی انتقال ژنی کارآمد در راستای ارتقای سلول درمانی فراهم نماید.