جداسازی، همسانه سازی و امتزاج ناحیه N-ترمینال ژن ipaD شیگلا دیسانتریه و زیرواحد B سم ریسین

شیگلا دیسانتریه پاتوژن مهمی است که باعث ایجاد عفونت در روده انسان می شود. آنتی ژنIpaD نقش مهمی در بیماری زایی و ایجاد عفونت توسط شیگلا دارد. چالش استفاده از پروتئین IpaD در طراحی واکسن مخاطی، قدرت پایین و عدم انتقال آن به بافتهای مخاطی روده می باشد. با اتصال ناقل و ادجوانت گیاهی RTB به آنتی ژن IpaD، می توان به رفع چالش تولید واکسن مخاطی علیه شیگلوزیس پرداخت. این تحقیق با هدف ساخت یک کاست ژنی شامل ناحیهN- ترمینال ژنipaD، که به ژنRTB متصل شده است به عنوان رویکردی جدید برای تولید واکسن مخاطی علیه شیگلا صورت می گیرد. DNA ژنومی گیاه کرچک به روش CTABاستخراج شد. با استفاده از پرایمرهای اختصاصی، قطعه 819 نوکلئوتیدی ژن RTB دارای لینکرGPGP، تکثیر گردید. واکنش PCRبرای تکثیر ژن ipaD نیز انجام گرفت. هر یک از قطعات تکثیر شده به درون وکتور pGEM-T همسانه سازی شدند. به منظور ساخت کاست ژنی، ipaD با آنزیم های XhoI/HindIII از درون وکتور pGEM-ipaD خارج گردید. متعاقب آن، پلاسمید نوترکیب pGEM-RTB تحت برش آنزیمی XhoI/HindIII قرار گرفت. طی فرایند الحاق ipaDبه پلاسمید نوترکیب pGEM-RTB برای ساخت کاست ژنی RTB-ipaD همسانه سازی شد؛ و با استفاده از دستگاه توالی یاب، توالی نوکلئوتیدی کاست ژنی شناسایی گردید. پس از تایید کلونینگ ژنهای RTB و ناحیه N-ترمینال ژن ipaD، کاست ژنی ساخته شده با عمل PCR،Nested-PCR، برش آنزیمی و تعیین توالی مورد تائید قرار گرفت. بر اساس آخرین اطلاعات، این اولین گزارش از طراحی و ساخت کاست ژنی RTB-ipaD می باشد، که می تواند برای توسعه تولید واکسن مخاطی علیه شیگلوزیس به کار رود. این تحقیق مسیری راهبردی را برای تولید فیوژن پروتئین و مطالعات ایمنولوژیکی می گشاید.