کلونینگ و بیان دومین III پروتئین پوششی ویروس دنگی نوع 2 در باکتری E. coli

هدف این مطالعه بیان آنتی ژن نوترکیبی از پروتئین پوششی ویروس دنگی، به منظور دست یابی به بیان بیشتر و به شکل محلول بود. بنابراین، قابلیت بیان دومین III این پروتئین در میزبان باکتریایی بررسی گردید.
هم ردیفی توالی های مختلف دومین III با استفاده از نرم افزار Megalign انجام شد. پیش بینی ساختار پروتئین با نرم افزار Modeller و بهینه سازی توالی ژن برای بیان در E. coli با نرم افزار Optimizer صورت گرفت. سنتز و کلونینگ ژن در حامل pET21a و بهینه سازی بیان پروتئین نوترکیب در E. coli انجام شد. برای تخلیص پروتئین از ستون های کروماتوگرافی Ni-NTA استفاده گردید. کارایی بیان پروتئین با روش های الکتروفورز و لکه گذاری وسترن بررسی شد.
یک توالی مورد توافق برای دومین III پروتئین پوششی سروتیپ 2 ویروس دنگی، ایجاد شد. ویژگی های ساختاری پروتئین هدف با استفاده از روش های بیوانفورماتیکی ارزیابی شد. با هدف دستیابی به بیان بالا، توالی ژن از لحاظ الگوی به کارگیری کدون و درصد GC بهینه سازی گردید. توالی ژن هدف با استفاده از روش های توالی یابی و هضم آنزیمی مورد تایید قرار گرفت. به منظور ایجاد پیوند دی سولفیدی در ساختار پروتئین، از میزبان بیانی Origami (DE3) استفاده شد. در نهایت بهینه سازی شرایط بیان پروتئین هدف انجام شد و غلظت مناسبی از پروتئین نوترکیب به صورت محلول به دست آمد.
نتایج این مطالعه نشان داد که بهینه سازی توالی دومین III منجر به تولید محصول پروتئینی با غلظت بالا (20 میلی گرم در لیتر محیط کشت) گردید. این سیستم بیانی می تواند جهت تولید دومین III پروتئین پوششی ویروس دنگی استفاده شود.