بهینه سازی انتقال ژن به ارقام گلابی (Pyrus communis L.) با استفاده از ژن گزارشگر gus

امروزه استفاده از روش های مهندسی ژنتیک توانسته است ضمن کوتاه کردن دوره طولانی اصلاح درختان میوه، این برنامه ها را هدفمندتر کند. منظور از اجرای این تحقیق، بهینه سازی و بررسی عوامل موثر بر انتقال ژن با استفاده از Agrobacterium tumefacience به دو رقم گلابی بارتلت (Bartlett) و هرو دیلایت (Harrow Delight) بود. در همین راستا، دو ریزنمونه برگی و مریستم جوانه جانبی با استفاده از اگروباکتریوم سویه EHA101 دارای ناقل دوتایی pBI121 شامل ژن های nptII و gus تلقیح شدند. عوامل موثر بر باززایی گیاهان تراریخت و فعالیت ژن gus که در این مطالعه بررسی شدند شامل غلظت باکتری مورد استفاده در تلقیح با دو تیمار OD600 (2/0 و 6/0)، غلظت استوسرینگون (μmol 100 و μmol250)، پلورونیک F-68 (صفر و 02/0%) و مدت زمان هم کشتی (24، 72 و 120 ساعت) بودند. نتایج نشان داد که رقم گلابی بارتلت از نظر باززایی و بیان ژن gus موفق تر از رقم هرو دیلایت است. هم چنین ریزنمونه جوانه جانبی جایگزین مناسبی برای ریزنمونه برگی شناخته شد. نتایج بهینه سازی عوامل مورد بررسی در این آزمایش نشان داد که در هر دو ریزنمونه، استفاده از غلظت کمتر باکتری باعث افزایش کارآیی انتقال ژن می شود. از سوی دیگر، استفاده از 250 میکرومول استوسرینگون می تواند بر انتقال ژن به هر دو ریزنمونه اثر مثبتی داشته باشد. در این بهینه سازی، حضور پلورونیک به عنوان یک ماده روکنش گر موثر شناخته شد. در بین مدت زمان های هم کشتی، کوتاه ترین تیمار (24 ساعت) بیشترین میزان انتقال ژن را نشان داد. تایید انتقال ژن به ژنوم گیاهان تراریخته به وسیله آزمون شیمی سلولی GUS، واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) و هم چنین لکه گذاری نقطه ای (Dot Blot) و لکه گذاری سادرن (Southern Blot) انجام شد.