مقایسه بیان موقت پروتئین HDA19 در برگ های Nicotiana tabacum و Nicotiana bentamiana

اخیرا بیان موقت ژن به منظور فراهم سازی روش های بسیار سریع ارزیابی بافت های گیاهی به عنوان یک منبع تولید پروتئین در مقایسه با روش وقت گیر و پرهزینه تراریختی پایدار گیاهان گسترش یافته است. مطالعه حاضر بیان موقت پروتئین HDA19 را در دو گونه از گیاه tobacco (Nicotiana tabacum وNicotiana bentamiana) نشان می دهد. برای این منظور پرایمرهای اختصاصی برای واکنش زنجیره ای پلی مراز طراحی و برای همسانه سازی ژن HDA19 در وکتور بیانی pB2GW7 به کار رفتند. سازه نوترکیب به Agrobacterium tumefaciens strain GV3101 انتقال یافت سپس برای تراریختی موقت گیاهان tobacco از طریق اگروباکتریوم استفاده شد. در نهایت وجود ژن هدف در لاین های تراریخت اگروباکتریوم از طریق کلونی PCR تایید گردید. از طرفی بیان پروتئین در لاین های تراریخت توسط روش دات بلات و الایزا تایید شد. اگرچه روش دات بلات و SDS-PAGE حاکی از تراریختی هر دو رقم بود ولی روش الایزا تولید پروتئین نوترکیب در گیاه تراریخت Nicotiana tabacum را تایید کرد که 400 میکروگرم در گرم وزن بافت تر برگ گیاه بود. با توجه به یافته های فوق این گیاه میزبان مناسبی برای تولید HDA19 نوترکیب، نماینده ای از پروتئین های هیستون داستیلاز، نسبت به Nicotiana bentamiana می باشد.