La forte expression du fragment C de la toxine tétanique dans Escherichia coli

Le fragment Cest le domaine C-terminal de la chaîne lourde de la toxine tétanique. Ce dernier favorisé la réponse immunitaire contre la dose létale de cette toxine et peut donc être considéré comme un candidat potentiel pour le vaccin contre linfection tétanique causée par Clostridium tetani. Dans cette étude, lexpression du fragment C de la toxine tétanique dans des cellules BL21 (DE3) pLysS dE. coli ayant une tolérance élevée aux toxines a été comparée en utilisant deux vecteurs dexpression différents, pET22b et pET28a, par SDS-PAGE et western blot. Après l’extraction de lADN de la souche Harvard CN49205 de C. tetani, le gène dintérêt a été amplifié par PCR, séquencé, cloné dans les vecteurs dexpression, pET22b et pET28a, transformé dans des cellules compétentes BL21 (DE3) pLysS et enfin exprimé selon un protocole optimisé. Les cellules ont été induites avec IPTG à quatre températures dincubation différentes (37, 33, 30 et 25° C) et trois temps dincubation différents (1 à 3 h). Bien que lexpression du fragment recombinant C (fragment C) ligaturé dans les deux vecteurs dexpression ait été confirmée par les analyses SDS-PAGE et western blot, pET28a a montré une expression plus élevée du fragment r C comparé à pET22b (38,66 mg / l contre 32,33 mg / l, p