شناسایی جایگاه های چند شکلی مهم بر روی ژن MSH2 در نمونه های سرطان کلورکتال با استفاده از آنالیز نقطه ذوب با وضوح بالا

سرطان کلورکتال (CRC) دومین سرطان شایع در کشورهای توسعه یافته است. بیشتر از10 % CRC بصورت ارثی می باشد و شامل سندرم لینچ HNPCC و FAP می باشد. ژن MSH2 بر روی کروموزم 2 (p21) قرار دارد و از 16 اگزون تشکیل شده است. MSH2 پروتئینی است که در فرایند ترمیمی MMR بعد از همانندسازی DNA نقش دارد. پروتئین MSH2 به MSH6 یا MSH3 متصل شده و کمپلکس های MutSα و MutSβ را تشکیل می دهدکه به ترتیب ناجورجفت های deletion/insertion کوچک و بزرگ را شناسایی می کنند. در پژوهش حاضر به منظور ردیابی جهش حذفی سه نوکلئوتیدی GTG در موقعیت اگزون 12 ژن MSH2 از تکنیک HRMA استفاده گردید. دو هدف اصلی این تحقیق بررسی کارایی و توانایی HRMA در تشخیص جهش های حذفی سه نوکلئوتیدی و تعیین فراوانی این جهش ها در حالت هموزیگوس وهتروزیگوس در نمونه های سرطان روده بزرگ نسبت به گروه کنترل می باشد. بدین منظور50 نمونه سرطان کلورکتال به همراه 50 نمونه سالم مورد بررسی قرار گرفت. ابتدا DNA ژنومی از نمونه های بافت پارافینه سرطانی استخراج شد و سپس با تکنیک HRMA و تعیین توالی یابی مستقیم جهش حذفی سه نوکلئوتیدی GTGمورد بررسی قرار گرفت. کنترل های به کار گرفته شده شامل توالی 96 جفت بازی در حالت تیپ وحشی و 93جفت بازی در حالت موتانت بود. نسبت مساوی از این دو برای حالت هتروزیگوس این جایگاه بکار گرفته شد. در مجموع نتایج این پژوهش نشان داد که تکنیک HRMA قابلیت تفکیک حذف و الحاق جفت بازها به صورت هموزیگوس و هتروزیگوت را با توجه به اختلاف دمای ذوب (Tm) آنها را دارد. در مطالعه حاضر با توجه به نتایج بدست آمده فراوانی حذف سه نوکلئوتیدی GTG در نمونه های سرطانی نسبت به افراد سالم به صورت معنی داری بیشتر بود