‫طراحی و ساخت ‪ BCG‬نوترکیب ترشح کننده پلیتوپهای ویروس‬ ‫هپاتیت ‪ c‬به عنوان کاندیدای واکسن‬

بیماری کبدی مرتبط با عفونت مزمن ویروس هپاتیت ‪ ،(HCV) c‬از مشکلات عمده بهداشت جهانی‬ ‫است. ولی هنوز واکسن تایید شده علیه ‪ HCV‬وجود ندارد. مشخص شده است که پاسخهای ایمنی سلولی، به‬ ‫خصوص پاسخهای ‪ CTL‬ نقش ویژهای در درمان عفونت با این ویروس دارند. نظر به اینکه واکسن ‪ BCG‬ توانایی‬ ‫تحریک پاسخ ایمنی سلولی را بخوبی دارد، لذا در تحقیق حاضر تلاش بر این بود که با ساخت کاندیدای واکسن‬ ‫‪ BCG‬ نوترکیب (‪ (recombinant BCG=rBCG‬ترشح کننده اپی توپهای ایمنودامیننت ‪ HCV‬ پاسخ ایمنی مناسب‬ ‫علیه آنها ایجاد شود.‬ ‫

قطعات ژنی ‪ HBsAg‬و پنج اپی توپ غالب شامل core132-142 , E2405-414 , E2614-622 , NS31406-1415 and core39-48 ‬به قطعه ژنی حاوی پروموتر Hsp60‬و ‪ antigen signal sequence‬از طریق ‪SOEing PCR‬‬ ‫متصل، وتکثیر شدند. سپس قطعات ساخته شده شامل ترادف ‪ HSP-S-HPOL‬در شاتل وکتور ‪ pVN2‬کلون‬ ‫شد. پلاسمید نهایی(‪ (pHSP-alpha-S-HPOL‬با روش الکتروپوریشن وارد ‪ BCG‬گردید. ‪ BCG‬نوترکیب در محیط‬ ‫کشت لونشتاین جانسون حاوی کانامایسین انکوبه شد.‬ ‫

سازه نهایی از طریق هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید شد. پس از گذشت 4 هفته، کلنی های نخودی رنگ‬ ‫ومقاوم به کانامایسین ‪ BCG‬ نوترکیب در سطح محیط کشت لونشتاین جانسون نمایان شدند. تایید پلاسمید در‬ ‫‪ BCG‬نوترکیب حاصل حاکی از موفقیت آمیز بودن الکتروپوریشن بود.‬ ‫

نتایج نشان داد که امکان ساخت ‪ rBCG‬مورد نظر پس از ساخت پلاسمید نهایی ‪pHSP-S-HPOL‬‬ ‫و ترانسفکت آن به ‪ BCG‬ وجود دارد. کلنیهای ‪ rBCG‬از نظر امکان ترشح پروتئین نوترکیب مورد نظر قابل ‫بررسی میباشند.‬