تعیین هویت لاین سلولی BHK-21-C5 ایران با PCR دو مرحله ای

تعیین هویت لاین سلولی BHK-21-C5 موجود در ایران با استفاده از PCR دو مرحله ای چکیده فارسی تعیین هویت لاین های سلولی حیوانی در بانک های سلولی یکی از مهمترین برنامه ها طی عملیات کشت سلول و ذخیره سازی سلول است که مستنداتی را ارایه می دهد که می تواند برای استفاده کاربردی از لاین های سلولی حیوانی مفید باشد. بنابراین تلاش ها برای جلوگیری از شناسایی نادرست سلول ها، آلودگی متقاطع با لاین های سلولی دیگر و خطا در لیبل گذاری با استفاده از روش های مختلف ادامه دارد و اغلب منجر به ارزیابی نادرست می گردد. این آلودگی ها در بسیاری از موارد غیر قابل جبران می باشد. یکی از روش های کاربردی در این زمینه روش مولکولی است که می تواند نتایج را با دقت بیشتری نشان دهد. در این مطالعه خصوصیات BHK-21 (C5) تعیین شد و سعی شد هویت BHK-21 (C5) به عنوان یک لاین سلولی پیوسته در ایران به وسیله روش مولکولی PCR تعیین شود. در این مطالعه ژن سیتوکروم اکسیداز C (COI) به عنوان یک قطعه DNA رایج برای تعیین هویت لاین سلولی BHK-21(C5) در کنار شش لاین سلولی شامل،CHO, LK, RBK, MRC5, VERO, GL با استفاده از PCR و همچنین تکثیر هرلاین سلولی با پرایمر مخصوص خودش انتخاب شد. پس از تکثیر، محصولات PCR با ژل آگاروز الکتروفورز به منظور اطمینان از صحت آن ها مورد بررسی قرار گرفت. نتایج آزمایشات نشان داد که درصد بقا حدود 92% تخمین زده شد و یک کشت سلول یک نواخت به دست آمد. زمان دو برابر شدن و نسبت μ معادل 5/20 ساعت و 03/0 بدست آمد. آزمایشات استریلیتی نشان داد که بذر سلول عاری از آلودگی های باکتریایی، مایکوپلاسمایی و مایکوباکتریومی بود. نتایج شناسایی مولکولی این سلول نشان می دهد که تعیین هویت این لاین سلولی اثبات شده است و می تواند در تحقیقات، مطالعات تشخیصی و تولید و کنترل کیفیت فراورده های بیولوژیک مورد استفاده قرار گیرد.