جداسازی و خالص سازی پروتئین های سبک وزن از فیلترای کشت مایکوباکتریوم توبرکلوزیس سویه سی (ATCC 35808)

در چندسال گذشته، تعدادی از آزمایشات جدید و سریع با هدف تشخیص بیماری سل توسعه یافته است که بر پایه آنتی ژن های سبک وزن ترشح شده از مایکوبکتریوم توبرکلوزیس می باشند که در محیط کشت باکتری ترشح می شوند. ما در این مطالعه، جداسازی و خالص سازی آنتی ژن های با وزن موکلولی پایین که از Mtb سویه C ترشح می شوند و استفاده از آنها جهت اهداف تشخیصی را مورد هدف قرار دادیم. در این مطالعه، پروتئین های ترشحی Mtb با استفاده از رسوب دهی توسط نمک سولفات آمونیوم وژل کروماتوگرافی ستون Sephadex-G50 استخراج شدند. فرکشن های آنتی ژنی به دست آمده برای تعیین غلظت پروتئین و تخمین وزن تقریبی مولکولی آنها به ترتیب با روش لوری و SDS PAGE (12.5%) مورد بررسی قرار گرفتند. سنجش DOT-ELISA و وسترن بلات با استفاده از سرم بیماران مبتلا به سل ریوی (آنتی بادی های پلی کلونال) برای تایید حضور پروتئین های خالص شده با وزن مولکولی کم، جدا شده از Mtbانجام شد. با استفاده از ژل کروماتوگرافی ، پروتئین های با وزن مولکولی پایین جدا شدند که تقریبا 7/0میلی گرم در میلی لیتر از کل پروتئین ها (662/1 میلی گرم در میلی لیتر) بود. در تجزیه و تحلیل SDS-PAGE ، پروتئین های خالص با وزن مولکولی در محدوده 14kDa تا41kDa ظاهر شدند. در آنالیز وسترن بلات فرکشن های کروماتوگرافی شده با استفاده از سرم بیماران سل، ما توانستیم باندهایی را در محدوده 30kDa تا 41kDa شناسایی کنیم. پروتئین های با وزن مولکولی پایین موجود در فیلتراسیون کشت Mtb سویه C با استفاده از نمک سولفات آمونیوم و کروماتوگرافی خالص شدند. این فرکشن ها با روش وسترن بلات تایید شدند. نتایج به دست آمده ممکن است این فرضیه را پشتیبانی کند که آنتی ژن های موجود در فیتراسیون کشت Mtb می تواند به عنوان یک روش سریع و حساس برای شناسایی بیماران مبتلا به سل ریوی مورد استفاده قرار گیرد.