همسانه سازی و توالی یابی ژن پروتئین غشای خارجی ompf سالمونلا تیفی عامل حصبه در باکتری اشریشیاکلی اوراگامی

سالمونلا تیفی از خانواده انتروباکتریاسه، باسیل گرم منفی و عامل ابتلا به بیماری های گوارشی از جمله حصبه می باشد. این باکتری دارای ساختار ویژه و ژن های مختلف از جمله ژن پروتیین غشای خارجی (ompf) می باشد. مطالعات اخیر امکان استفاده از ompf را در ساخت واکسن حصبه تشخیصی نشان داده است. به همین جهت هدف از انجام این تحقیق همسانه سازی و توالی یابی ژن ompf سالمونلا تیفی عامل حصبه در باکتری اشرشیاکلی اوراگامی به منظور دستیابی به واکسن می باشد.

نمونه برداری از افراد مبتلا به حصبه طی 4 ماه از بخش عفونی مراکز درمانی در استان تهران انجام شد. پس از شناسایی و انجام تست های اختصاصی بیوشیمیایی، سالمونلا تیفی جداسازی و استخراج DNA صورت گرفت. سپس از طریق آزمون PCR سویه های سالمونلا تیفی واجد ژن ompf استخراج شد. ژن ompf سویه های مثبت از طریق وکتور به باکتری میزبان اشرشیاکلی الحاق و از طریق تکنیک TA کلونینگ کلون شدند. در پایان از طریق تکنیک Real time PCR میزان بیان ژن ها در اشرشیا کلی اوراگامی سنجیده شد. برای رسم درخت فیلوژنی از نرم افزار clustalX و Mega5 استفاده شد.

از مطالعه تحقیقی-مقطعی نمونه های بالینی ارسالی به آزمایشگاه که براساس خصوصیات مورفولوژیک، میکروسکوپی و تست های بیوشیمیایی تعیین هویت شده بودند در مجموع 12 ایزوله سالمونلا تیفی جداسازی شد و از این تعداد تنها یک ایزوله دارای ژن ompf بود. پس از کلونینگ، ژن های ompf، سویه های کلون شده کلنی سلکشن (آبی/سفید) جداسازی شدند. به منظور تایید نتایج کلونینگ DNA، از کلنی های مشکوک استخراج و توسط آزمون Real time PCR گردید. تصاویر توالی یابی، m13 و منحنی تکثیر، بیان ژن در باکتری اشریشیاکلی اوریگامی را تایید کرد.

در این مطالعه با ارزیابی ژنومی سالمونلا تیفی جدا شده از افراد مبتلا به حصبه، ژن ompf با پتانسیل ایمن سازی و به منظور ساخت واکسن از این باکتری استخراج گردید و کلونینگ با موفقیت صورت گرفت. در نهایت با بررسی درخت فیلوژنی رسم شده در این مطالعه میزان تشابه و خویشاوندی گونه سالمونلا تیفی با سایر گونه ها نشان داده شد.