تولید آنتی ژن پلی اپی توپی نوترکیب HPV16-E6: بررسی اثر سویه ها و شرایط محیطی متفاوت

سرطان دهانه رحم با حدود 528000 مورد بیمار و 266000 مرگ در سال، یکی از سرطان های رایج در بین زنان جهان به شمار می رود و عفونت پایدار با ویروس پاپیلومای انسانی  HPV عامل اصلی آن است. واکسن های مبتنی بر پپتید مشتق شده از دو پروتیین انکوژن E6 و E7 به علت ایمنی و پایداری بالا و سهولت در تولید، پتانسیل بالایی برای تولید واکسن درمانی HPV نشان داده اند. در این مطالعه اثر سویه های مختلف اشرشیاکلی در کنار پارامترهای محیطی ازجمله دما، زمان القایی و غلظت القاکننده بر میزان بیان پروتیین پلی اپی توپ نوترکیبHPV16-E6  بررسی می شود.

مواد و روش‏‏ها:

 در این مطالعه ژن بهینه شده پروتیین نوترکیب E6، در درون وکتور دارای پروموتور T7 کلون شد. وکتور نوترکیب به سویه های اشرشیاکلی BL21(DE3)، BL21(DE3)-AI، Rosetta، C41(DE3) و BL21(DE3)-pLysS ترانسفورم شد و توانایی این سویه ها برای بیان پروتیین نوترکیب مدنظر در شرایط مختلف محیطی مقایسه شد. بیان پروتیین نوترکیب E6 در سویه های ذکرشده، در دو دمای 25 و 37 درجه سانتی گراد و غلظت های 0/1 و 1/0 میلی مولار از IPTG و زمان های مختلف انکوباسیون بررسی شدند.

پس از انجام بهینه سازی بیان، شرایط بهینه برای بیان پروتیین نوترکیب E6 به دست آمد. بیشترین میزان بیان در سویه اشرشیاکلی BL21(DE3)-AI و در شرایط Optical Density (OD)=0.9، غلظت 1/0 میلی مولار IPTG و مدت زمان القای 16 ساعت در دمای 25 درجه سانتی گراد به دست آمد.

بحث و نتیجه ‏گیری:

 نتایج به دست آمده از این مطالعه می توانند برای تولید پروتیین E6، به عنوان کاندید واکسن درمانی در درمان سرطان های مرتبط با HPV استفاده شوند.