ارزیابی لاین سلولی BHK-21 از نظر آلودگی به ویروس های اختصاصی با استفاده از دو روش متفاوت PCR

انانتخاب کشت های سلولی مناسب برای استفاده در صنایع بیولوژی و همچنین تحقیقات و مطالعات تشخیصی بسیار حیاتی است. یکی از عوامل موثر بر کشت های سلولی که می تواند نتایج مطالعات را تحت تاثیر قرار دهد، آلودگی این سلول ها به عوامل ویروسی است. بنابراین، تلاش برای حفظ سلامت کشت های سلولی از آلودگی و استفاده از سلول های عاری از ویروس در تحقیقات و مطالعات تشخیصی و همچنین در صنایع تولیدی بسیار مهم است. بدین منظور استفاده از روش های تشخیصی سریع و صحیح برای تشخیص وجود آلاینده های ویروسی مهم در سلول ها حایز اهمیت است. علاوه بر این، استفاده از روش های تشخیصی بسیار حساس نیز اهمیت دو چندانی دارد، به ویژه در مورد آلاینده هایی که ممکن است پنهان بمانند. بنابراین در این مطالعه رده سلولی BHK-21C5 که یکی از پرکاربرد ترین سلول ها در تولید و کنترل کیفی محصولات بیولوژیکی و همچنین مطالعات ویروس شناسی است، از نظر آلودگی به مهم ترین ویروس ها یعنی BVD و BLV مورد بررسی قرار گرفت. شناسایی آلاینده های احتمالی با استفاده از RT-PCR دو مرحله ای برای شناسایی بخش 5' UTR ویروس BVD انجام شد. علاوه بر این، Nested PCR برای شناسایی ویروس BLV با استفاده از ناحیه ژن gp51 env انجام گرفت. همچنین، یک رده سلولی Flk و رده سلولی Hela که به طور مداوم به ویروس BLV آلوده بودند به عنوان کنترل مثبت در Nested PCR استفاده شد. با توجه به مشاهده باند 283 bp در کنترل مثبت ویروس BVD و عدم مشاهده این باند در سلول BHK، هیچ گونه آلودگی ناشی از این ویروس در این سلول ردیابی نشد. همچنین با توجه به ظهور باند 444 bp در سلول های کنترل مثبت یعنی سلول Hela و سلول FLK مربوط به ویروس BL و عدم مشاهده این باند در سلول BHK، این سلول آلوده به این ویروس نیز نمی باشد. بنابراین نتایج نشان داد که هیچ اثری از آلودگی ویروسی آشکار یا پنهان در کلون سلولی مورد مطالعه مشاهده نشد. از این رو استفاده از این کلون سلولی در کنترل کیفی و تولید محصولات بیولوژیکی و مطالعات تحقیقاتی و تشخیصی بلامانع می باشد.