کلونینگ آنزیم آلفا گالاکتوزیداز با هدف تبدیل آنتی ژن B گروه خونی به آنتی ژن O
کمبود گروههای خونی سیستم ABO یکی از مشکلات متداول مراکز انتقال خون در دنیا میباشد. هم ز مان با پیشرفت علم مهندسی ژنتیک و تخلیص پروتیینها، تبدیل آنتیژنهای A و B به آنتیژن O و ایجاد گروه خونی واحد مطرح شد. هدف از این پژوهش، بیان ژن آلفا گالاکتوزیداز در میزبان پروکاریوتی E.coli با ایجاد تغییرات پس از ترجمه و در نهایت تبدیل آنتیژن B گروه خونی به آنتیژن O بود.
در این مطالعه تجربی، ژن آلفا گالاکتوزیداز دانه قهوه که پس از بهینهسازی کدونها در پلاسمید pBHA حاوی جایگاه برش آنزیمهای BamH1 و Nco1 کلون شده بود، در باکتری E.coli سویه TOP10 تکثیر و استخراج شد. ژن آلفا گالاکتوزیداز پس از برش با آنزیم های فوق و تخلیص روی ژل آگاروز مجددا در پلاسمید بیانی pET-20b کلون شده و به باکتری E.coli سویه rosetta 2 (DE3) وارد شد. بیان ژن با استفاده از القاکننده IPTG انجام شد. وجود پروتیین تولیدی با استفاده از SDS-PAGE و وسترن بلات بررسی شد. آزمون عملکرد پروتیین نیز با توانایی تبدیل گلبولهای B به O ارزیابی شد.
وسترن بلات و SDS-PAGE وجود پروتیین در پری پلاسم باکتری را تایید کرد. آنزیم تخلیص شده توانست آنتیژن B را به طور نسبی از گلبول قرمز حذف کرده و میزان آگلوتیناسیون با آنتیسرم B را به میزان زیادی کاهش دهد.
بیان پروتیین یوکاریوتی در میزبان پروکاریوتی میتواند در تولید انبوه آنزیم گالاکتوزیداز برای کاربرد در مراکز انتقال خون کارگشا باشد. بهینه سازی شرایط مختلف بیان برای دستیابی به مقادیر کافی از آنزیم ضروری میباشد.
پرداخت حق اشتراک به معنای پذیرش "شرایط خدمات" پایگاه مگیران از سوی شماست.
اگر عضو مگیران هستید:
اگر مقاله ای از شما در مگیران نمایه شده، برای استفاده از اعتبار اهدایی سامانه نویسندگان با ایمیل منتشرشده ثبت نام کنید. ثبت نام
- حق عضویت دریافتی صرف حمایت از نشریات عضو و نگهداری، تکمیل و توسعه مگیران میشود.
- پرداخت حق اشتراک و دانلود مقالات اجازه بازنشر آن در سایر رسانههای چاپی و دیجیتال را به کاربر نمیدهد.