بررسی تاثیر ال- آرژنین بر القای کلونی زایی سلول های بنیادی اسپرماتوگونی گوسفند در محیط آزمایشگاه

سلول های بنیادی اسپرماتوگونی دارای توانایی خودنوسازی و تمایز بوده و می توانند صفات ژنتیکی را به نسل بعدی منتقل کنند. بنابراین ایجاد محیط کشت مناسب برای این رده سلولی مهم است. هدف از مطالعه حاضر بررسی تاثیر غلظت های مختلف ال- آرژنین بر کلونی زایی سلول های بنیادی اسپرماتوگونی گوسفند در محیط آزمایشگاه بود.

نوع مطالعه حاضر تجربی بود. پنج بار نمونه گیری و تکرار آزمایش انجام شد. سلول های اسپرماتوگونی طی دو مرحله هضم آنزیمی از بیضه بره های نابالغ جداسازی شدند. سلول ها به مدت 10 روز در شش گروه آزمایشی کشت داده شدند. برای گروه کنترل، کشت ساده سلول های اسپرماتوگونی در محیط DMEM حاوی یک درصد آنتی بیوتیک و 5 درصد FBS انجام شد. در گروه های تیمار 1، 2، 3، 4 و 5 نیز غلظت های مختلف ال- آرژنین (50، 100، 200، 500 و 1000 میکرومول بر لیتر) به ترتیب به محیط کشت اضافه شد. تعویض محیط های کشت هر سه روز یک بار انجام شد. ماهیت سلول ها با رنگ آمیزی ایمنوسیتوشیمی علیه آنتی ژن های PGP9.5 و PLZF تایید شد. بلافاصله پس از جداسازی، درصد زنده مانی سلول ها، تعداد و مساحت کلونی های تشکیل شده در روزهای 4، 7 و 10 پس از کشت، توسط میکروسکوپ معکوس ارزیابی شدند. داده ها توسط آزمون واریانس یک طرفه آنالیز شدند. سطح معنا داری 0/05>P در نظر گرفته شد.

یافته ها: 

نتایج نشان دادند که میزان زنده مانی سلول های اسپرماتوگونی پس از جداسازی 1/4 ± 89/28درصد بود. سلول های استخراج شده آنتی ژن های PGP9.5 و PLZF را بیان کردند. همچنین در روز 10 پس از کشت و در تیمار 4 (200 میکرومول بر لیتر ال- آرژنین)؛ تعداد (21/1± 160/8) و مساحت (3/1 ± 4/5) کلونی های سلول های اسپرماتوگونی افزایش معنا داری در مقایسه با سایر گروه ها داشت (0/05>P).

نتیجه گیری:

 به نظر می رسد افزودن ال- آرژنین با دوز 200 میکرومول بر لیتر تاثیر مثبتی بر القای کلونی زایی سلول های بنیادی اسپرماتوگونی دارد و می تواند محیط کشت مناسبی را در محیط آزمایشگاه فراهم کند.