کلون کردن و بیان ژن H ویروس PPR در سیستم بیانی باکولو ویروس

سابقه و هدف:

 بیماری طاعون نشخوار کنندگان کوچک یکی از مهم ترین عوامل بیماری زا از نظر اقتصادی در گوسفند و بز است که بوسیله موربیلی ویروس ها ایجاد می شود. پروتین H یکی از پروتین های اصلی ایجاد ایمنی بر علیه PPRV است. هدف از پژوهش حاضر کلون و بیان ژن H این ویروس بوسیله سیستم بیانی باکولو ویروس میباشد.

مواد و روش ها: 

ژن H با روش RT-PCR و آغازگر های اختصاصی، تکثیر و در پلاسمید pFastBac Dual کلون شد. سپس بکمید نوترکیب واجد ژن فوق در سلول میزبان DH10Bac تولید شد. با ترانسفکت کردن سلول Sf9 با بکمید نوترکیب، میزان بیان و خصوصیات آن با روشهای SDS-PAGE، western blotting و بردفورد بررسی گردید.

یافته ها:

 ژن H با استفاده از پرایمر های اختصاصی از روی ژنوم ویروس PPR به درستی تکثیر و باند اختصاصی بدست آمد و بعد از انتقال بر روی وکتور pFastBac Dual  و سپس بر روی ژنوم باکولو ویروس، صحت کار با استفاده از PCR و هضم آنزیمی اثبات شد. با ترانسفکت کردن بکمید نوترکیب در سلول های Sf9 و انجام پاساژهای متوالی، با استفاده از SDS-PAGE و وسترن بلات نشان داده شد که پروتین نوترکیب حاصل، کاملا خالص و اختصاصی می باشد. میزان بیان این ژن µg/ml 218 بدست آمد.

نتیجه گیری:

 با توجه به تولید میزان مناسبی از پروتین نوترکیب H، این پروتین می تواند گزینه مناسبی برای تولید واکسن نوترکیب بر علیه PPRV باشد.