کلون سازی و بیان ژن flab هلیکوباکتر پیلوری در سیستم یوکاریوتی به منظور تهیه واکسن

داشتن فلاژل و تحرک از عوامل مهم در استقرار و بیماری زایی هلیکوباکتر پیلوری می باشد. flaB ، یکی از ژن های مهم کد کننده پروتیین تاژکی است که آنتی بادی تولید شده علیه آن نقش عمده ای در ایمنی زایی ایفا می کند. هدف از این پژوهش، ساخت سازواره ژنی حامل ژن flaB  و بررسی بیان آن در سلول های یوکاریوتی به عنوان گزینه ای برای تولید واکسن می باشد.

کلون سازی و ساب کلونینگ ژن flaB  در پلاسمیدهای pTZ57RT   و pBudCE4.1  انجام شد. سپس صحت کلون های بدست آمده با روش های PCR، هضم آنزیمی دوگانه و توالی یابی تایید شد. پس از انتقال سازواره تایید شده به سلول های HDF، بیان ژن در سطح ترانس کریپتوم و پروتیوم به دو روش RT-PCR و SDS-PAGE بررسی شد.

نتایج PCR نشان دهنده تکثیر قطعه 1563 جفت بازی مربوط به ژن  flaB بود. کلون سازی ژن مورد نظر با استفاده از سه روش PCR، هضم آنزیمی دوگانه و توالی یابی تایید گردید. مشاهده باند های 1563 جفت بازی و 56 کیلودالتونی حاصل از RT-PCR و SDS-PAGE نشان دهنده بیان موفق این سازواره در سلول های HDF بود.

سازواره نوترکیب توانایی تولید پروتیین FlaB را در سلول های جانوری دارد، بنابراین با توجه به نتایج بدست آمده این سازواره می تواند به عنوان یک انتخاب به منظور تولید واکسن ژنی موثر علیه هلیکوباکتر پیلوری استفاده گردد.