استفاده از پلتفرم سوسپانسیون سلول های گیاهی BY-2 برای تولید آنزیم بتا-1و3 گلوکاناز

به دلیل افزایش تقاضا برای پروتئین های نوترکیب عاری از فرآورده های حیوانی، سلول های گیاهی به عنوان یک پلتفرم مناسب برای تولید این پروتئین ها مورد توجه می باشند. نگهداری ارزان، ساده بودن جداسازی و خالص سازی محصول تولید شده و کشت مستقل از شرایط آب و هوایی، کیفیت خاک، فصل ها، طول روز و وضع هوا از مزیت های استفاده از سوسپانسیون های سلولی می باشد. در این تحقیق از سلول های گیاهی BY-2  استفاده شد که علاوه بر مزیت های فوق، سرعت تقسیم بالای سلولی از ویژگی های مهم سلول های BY-2 است. به منظور بهینه سازی انتقال و بیان ژن در سلول های BY-2، ابتدا ژن گزارشگرβ-glucuronidase (gus) به این سلول ها منتقل شد. برای اثبات حضور ژنgus  در سلول های BY-2، قطعه bp521 مورد انتظار با استفاده از PCR تکثیر شد. جهت تایید بیشتر تراریخته بودن سلول های BY-2، از سنجش بیوشیمیایی GUS که باعث تغییر رنگ (آبی) سلول ها می شود استفاده شد. جهت بیان  آنزیم بتا-1و3 گلوکاناز، ژن (bgnI) β-1,3 glucanase حاوی اینترون از جدایه قارچ Trichoderma virens در وکتور دوگانه pBI121GUS-  همسانه سازی و سازه بدست آمده به سلول های BY-2 جهت بیان پروتئین منتقل شد. بررسی بیان آنزیم بتا 1و3 گلوکاناز در سلول های تراریخته، با استفاده از الگوی پروتئینی توسطSDS-PAGE  انجام گرفته و بیان آنزیم مورد نظر در سلول هایBY-2  مورد تایید قرار گرفت. برای تعیین فعالیت آنزیم بتا-1و3 گلوکاناز (BgnI) از روش دی نیترو سالسیلیک اسید (DNS)، جهت اندازه گیری مقدار قند های احیا شده حاصل از عمل این آنزیم استفاده شد. نتایج بدست آمده نشان داد که سلول های BY-2 تراریخته قادر به بیان آنزیم بتا 1و3 گلوکاناز فعال می باشند.