طراحی، ساخت و بررسی کیت تشخیصی واکنش زنجیره ای پلیمراز در زمان واقعی (real-time PCR) کووید19

تشخیص دقیق و حساس RNA کووید19 از ارزش تشخیصی بسیار بالایی برخوردار است. واکنش زنجیره ای پلیمراز در زمان واقعی (real-time PCR) دقیق ترین تست تشخیصی (استاندارد طلایی) کووید19 شناخته می شود که RNA یا ماده ژنتیکی اختصاصی ویروس را ردیابی می کند و می تواند ویروس را طی چند روز پس از ابتلا به عفونت تشخیص دهد. لذا هدف از این مطالعه, تعیین و طراحی یک روش حساس بر پایه Real-time PCR برای تشخیص کووید19 می باشد.

این یک مطالعه تجربی کاربردی می باشد. تمامی نمونه گیری ها و تست های آزمایشگاهی در مرکز آموزشی درمانی امام رضا (ع) لارستان، آزمایشگاه مولکولی تشخیص کرونا دانشکده علوم پزشکی لارستان و مرکز تحقیقات بیولوژی سلولی و مولکولی دانشکده علوم پزشکی لارستان در سال 1400 انجام شد. آغازگرها و کاوشگر اختصاصی کووید19 برای جایگاه ژنی ژن های N و RdRp به وسیله نرم افزار الیگو 7 طراحی و سپس با استفاده از سایت NCBI بلاست شد. پس از سنتز آغازگرها و کاوشگرها، کیت real-time PCR بر روی 100 نمونه مثبت امتحان و تست ‍ های حساسیت (sensitivity)، اختصاصیت (specificity)، پایداری (stability) و اعتبارسنجی (validation) انجام شد. داده های جمع آوری شده با استفاده از آزمون حساسیت و اختصاصیت بالینی تجزیه و تحلیل شدند.

کیت طراحی شده در این مطالعه قادر به شناسایی تمامی نمونه های مثبت کووید 19 بود. در تست تعیین حساسیت، میزان حد تشخیص (Limit of Detection; LOD) کیت تشخیصی کووید19 تولید شده در این مطالعه 40 کپی در میلی لیتر گزارش شد. با بررسی نمونه های منفی و مثبت، اختصاصیت و دقت این کیت 100 درصد بوده، فقط قادر به شناسایی ویروس کووید19 بوده و تکرارپذیری بالا را نشان می دهد. کیت به خوبی شوک دمایی را تحمل کرده و دارای پایداری بالایی می باشد. علاوه براین، تفاوت معنی داری بین کیت تولید شده در این مطالعه و کیت تجاری خارجی وجود ندارد.

با توجه به سطح حساسیت، اختصاصیت و هم چنین دقت و پایداری مناسب در مقایسه با کیت های مشابه، این کیت می تواند برای تشخیص موثر ویروس کووید19 مناسب باشد.