تولید و خالص سازی آنزیم پروتئاز قلیایی از باسیلوس قلیادوست جدا شده از خاک

پروتیازها جزو مهم ترین آنزیم های صنعتی هستند پروتئازهای قلیایی در ترکیب شوینده ها استفاده می شوند. از آن جایی که مقاومت در برابر حرارت و محیط قلیایی دو خصوصیت مهم آنزیم ها به هنگام افزودن به ترکیب پاک کننده ها است لذا جستجو برای یافتن منابع آنزیمی و آنزیم های قلیایی دارای اهمیت بسیاری می باشد. هدف از انجام این مطالعه بررسی جداسازی باسیلوس قلیا دوست از خاک و امکان تولید آنزیم پروتئاز قلیایی از سوش جدا شده و خالص سازی آنزیم تولید شده بود.
عملیات جدا سازی و تخلیص باسیلوس قلیا دوست از نمونه های خاک با استفاده از کشت در محیط اختصاصی با هدف شناسایی فعالیت پروتئازی اولیه و سپس تخلیص سویه های دارای فعالیت پروتئازی انجام گردید. پس از آن گونه باسیلوس 5-2 در محیط مناسب با شرایط معین کشت داده شد. و خالص سازی آن از طریق: 1- رسوب دهی فاز آنزیمی از طریق اشباع سازی با آمونیوم سولفات 55%. 2- تغلیظ توسط اولترافیلتراسیون 3- کروماتوگرافی تعویض کاتیونی توسط رزین کربوکسی متیل سلولز صورت گرفت. در تمام مراحل فعالیت پروتئاز قلیایی از طریق هیدرولیز سوبسترای کازئین در 10pH برای مدت زمان مشخص و سپس اندازه گیری محصول پروتئولیز (میزان معادل تیروزین) در طول موج 275 نانومتر انجام می گرفت.
با مقایسه خصوصیات بیوشیمیایی و تاکسونومیک، باسیلوس 5-2 با باسیلوس آلکالوفیلیک تطابق داشت. هم چنین این سویه در pH های قلیایی دارای فعالیت پروتئولیتیک و آمیلولیتیک بود ولی فعالیت ژلاتینولیتیک نداشت. پیشرفت خالص سازی با روش الکتروفورز روی ژل پلی آکریل آمید (PAGE) بررسی و جرم ملکولی آنزیم با روش SDS-PAGE و با کمک استانداردهای پروتیینی معادل 24700 دالتون معین گردید.
پس از اتمام خالص سازی راندمان کل 24% و مرتبه خالص سازی 50 بار تعیین شد که راندمان خالص سازی نهایی به دست آمده مشابه راندمان به دست آمده در سایر تحقیقات بود. به نظر می رسد ملکول این آنزیم یک ملکول منومر باشد چون میزان تحرک الکتروفورتیک تک باند های به دست آمده در PAGE وSDS-PAGE مشابه یکدیگر بود.