ارائه یک روش نوین جهت جایگزینی ژن بتاگلوبین در یک مرحله با استفاده از استراتژی انتخاب مثبت و منفی دوگانه

هدف طراحی و ساخت یک سازه جدید با دو مارکر مثبت و دو مارکر منفی برای هدف گیری ژن بتاگلوبین قطعات مختلف سازه با روش PCR تکثیر و در وکتور pTZ57T/A کلون و سپس در pBGGT ساب کلون و پلاسمید نهایی ساخته شد. تمام کلون های بینابینی و پلاسمید نهایی با روش های PCR، هضم آنزیمی و تعیین توالی بررسی شد. سلول های COS-7 با سازه ژنی، ترانسفکت و مراحل انتخاب مثبت و منفی با داروهای مربوطه انجام شد. سلول های باقی مانده با PCR بررسی شد.
نتایج حاصل از PCR و هضم آنزیمی و تعیین توالی همگی تایید کننده صحت انجام مراحل کار بود. نتیجه تعیین توالی محصول PCR انجام شده روی ژنوم سلول های باقیمانده تایید کننده وقوع نوترکیبی هم سان در این سلول ها بود.
استراتژی استفاده از دو مارکر مثبت و دو مارکر منفی روشی نوین و مناسب برای جایگزینی ژن بتا گلوبین سالم با ژن جهش یافته است.