مقایسه محیط های رایج به منظور بررسی میزان تحرک و توانایی اسپرم گاو در جذب DNA

انتخاب محیط مناسب برای انکوباسیون اسپرم و DNA از نظر درصد تحرک اسپرم و ارزیابی توانایی اسپرم گاوهای نر هلشتاین ایرانی در جذب DNA در این محیط اسپرم های منجمد شده یک گاو نر هلشتاین ایرانی، ذوب گردید. اسپرم های متحرک با روش گرادینت Puresperm (40/80 درصد) جدا شده و با محیط SP-TALP دو بار شسته شدند. سپس اسپرم ها با یکی از محیط های PBS، Opti-MEM و SP-TALP یک بار شست وشو داده شده و انکوباسیون اسپرم و ترانس ژن در این محیط ها به مدت یک ساعت انجام گرفت. پلاسمید خطی شده pEGFP-C1 به مدت یک ساعت در دمای37 درجه سانتی گراد با 106 با اسپرم ها انکوبه شدند. مخلوط اسپرم و DNA با استفاده از آنزیم DNase I تیمار شده و شست وشوی آنها با PBS انجام گردید. DNA استخراج شده از اسپرم ها و از مایع رویی آخرین مرحله شست وشوی اسپرم، جهت انجام PCR استفاده گردیدند. آنالیز و مقایسه میانگین درصد تحرک اسپرم در محیط های مختلف با استفاده از آزمون دانکن و نرم افزار SAS0 انجام شد.
درصد تحرک اسپرم ها در محیط های PBS، Opti-MEM و SP-TALP به ترتیب (89/2±)40، (53/1±)2 و (41/4 ±)54 بود. نتایج PCR با استفاده از DNA استخراج شده از اسپرم های ترانسفکت شده نشان داد که ترانس ژن وارد اسپرم شده و تحت اثر هضم آنزیمی حذف نشده است.
این آزمایش نشان داد که بهترین محیط برای انکوباسیون اسپرم و DNA از نظر درصد تحرک اسپرم، محیط SP-TALP است. ترانس ژن علاوه بر توانایی اتصال به غشای اسپرم گاوهای هلشتاین ایرانی، توانایی جذب به داخل آن را نیز دارد و بنابراین می توان از این اسپرم ها به عنوان ناقل ترانس ژن به تخمک استفاده کرد.