یک روش بهینه برای تهیه مقادیر بالایی از هپاتوسیتهای ایزوله توسط پرفیوژن کبد رت با آنزیم کلاژناز

تهیه مقادیر بالایی از هپاتوسیتهای ایزوله برای استفاده در آزمایشات In vitro برای پرفیوژن کبد موش از یک مجموعه تجهیزات به نام سیستم پرفیوژن استفاده می شود که اجزای آن شامل یک پمپ پریستالتیک، حمام آب گرم، pH متر، کپسول گاز اکسیژن و دی اکسید کربن، فلومتر، تعدادی لوله های پلی اتیلنی و کانول است.
پرفیوژن کبد را می توان به دو روش تک مرحله ای و دو مرحله ای انجام داد. در روش دو مرحله ای ابتدا کبد با یک محلول بافری فاقد یون کلسیم و به همراه یک شلاته کننده کلسیم، پرفیوژ داده شده و در مرحله دوم پرفیوژن با محلول بافری حاوی آنزیم کلاژناز ادامه می یابد. بدین ترتیب با حذف اتصالات بین سلولی و بافت همبند، هپاتوسیتها پس از باز کردن کپسول کبدی به راحتی و بدون هیچ گونه آسیبی به آنها از هم جدا می شوند.
در این روش بازده هپاتوسیتهای ایزوله سالم بسیار بالا می باشد (بیش از 90 درصد) به طوری که در هر بار پرفیوژن کبد رت با وزن تقریبی 200 گرم حدود 500 میلیون سلول سالم به دست می آید. هپاتوسیتهای جدا شده در این روش فعالیت متابولیکی خود را حدود 10 ساعت حفظ می کنند.
به دلیل ویژگی های خاص این روش بهینه، از جمله بازده بالای هپاتوسیتهای ایزوله سالم و نیز حفظ فعالیت متابولیکی آنها در زمانهای نسبتا طولانی، دارا بودن اکثر ویژگی های یک سلول سالم در In vitro از جمله نفوذپذیری آنها، امکان طراحی سیستم در داخل کشور، سهولت کار و نیز صرفه جویی در مصرف دارو، انجام صدها آزمایش تنها به وسیله یک نمونه حیوان، رفع مشکل واکنش حیوان نسبت به برخی از داروها، صرفه جویی در زمان آزمایش های مربوطه به پاسخ حیوان به دوز دارو، می توان از آن به عنوان یک جانشین مناسب جهت آزمایشاتی که روی مدلهای حیوانی، رده های سلولی و نیز فراکسیونهای سلولی انجام می شود، استفاده نمود.