اثر برخی از دترجنت ها و عوامل پایدارکننده بر فعالیت آنزیم فسفاتیدات فسفوهیدرولاز غشایی (PAP2) کبد موش صحرایی

آنزیم فسفاتیدات فسفوهیدرولاز(PAP) تبدیل اسید فسفاتیدیک به دی آسیل گلیسرول و فسفات معدنی (Pi) را کاتالیز می کند. دو فرم مختلف از آنزیم PAP درسلول های کبدی موش صحرایی گزارش شده است، یکی PAP1 که در متابولیسم فسفولیپیدها وگلیسرولیپیدها دخالت دارد و شکل دیگر PAP2که در پدیده Signal transduction نقش دارد. متعاقبا اثبات شد PAP2 دارای دو ایزوفرم PAP2a و PAP2b می باشد. هدف از این مطالعه بررسی اثر عوامل دترجنتی توئین 80، لوبرول PX، CTAB و غیردترجنتی سوکروز، تره هالوز و آلبومین بر پایداری وفعالیت PAP2b می باشد. تعداد 14 سر موش های صحرایی نر از نژاد Wistar و در محدوده وزنی 250-200 گرمی مورد استفاده قرارگرفت. PAP2b از غشاء سلول های کبدی موش صحرایی با استفاده از n- اکتیل گلوکوزید محلول سازی و طی چندین مرحله کروماتوگرافی تخلیص گردید. SDS پلی اکریل آمید ژل الکتروفورز برای تعیین درجه خلوص، تعداد و وزن زیرواحدهای آنزیمی در ژل 10درصد به صورت ناپیوسته انجام گرفت. اثرسوکروز، تره هالوز و آلبومین برفعالیت PAP2b در غلظت های مختلف بررسی شد.
PAP2b تخلیص شده، فعالیت ویژه ای معادل mU/mg protein7350 داشت. الکتروفورز PAP2b تخلیص شده در حضور SDS یک نوار با وزن مولکولی 8/33 کیلو دالتون نشان داد. فعالیت آنزیم PAP2b با لوبرول PX و توئین 80 در غلظت mM3 تقریبا 3 برابر تحریک گردید و با CTAB در غلظت mM4-1 برابر تحریک شد. تره هالوز، سوکروز و آلبومین به ترتیب در غلظت های 3، 7 و 10 درصد در محیط سنجش بیشترین اثر پایدارکنندگی را برای آنزیم داشتند.
دترجنت های توئین 80، لوبرول PX و CTAB نیز قادر به تحریک فعالیت آنزیم PAP2b هستند. در صورت نیاز به پایدار نمودن آنزیم PAP2b به وسیله عوامل غیردترجنتی، استفاده از تره هالوز بهتر از سوکروز و آلبومین است. دترجنت غیریونی لوبرول PX نسبت به سایر دترجنت های یونی و غیر یونی توانایی بیشتری در فعال سازی آنزیم PAP2b نشان می دهد.