روش سریع و مؤثر ترانسفورم سازی باکتری اشریشیاکلی

ترانسفورم سازی مولکولی سلول های باکتری، نقشی محوری را در روش های کلون سازی مولکولی ایفا می کند. در حال حاضر عمل ترانسفورم سازی به روش شیمیایی و یا به روش شوک الکتریکی (الکتروپوریشن) انجام می شود. درصد موفقیت این روش ها به میزان تجربه و دقت آزمایش کننده ارتباط دارد. بنابراین هر اندازه روش ترانسفورم سازی مولکولی کارایی و کیفیت بیش تری داشته باشد درصد میزان موفقیت آن روش افزایش خواهد یافت، هدف از تحقیق حاضر طراحی یک روش ساده و سریع برای ترانسفورم سازی مولکولی سلول های E.coli بود تا ضمن عدم نیاز به ابزارهای گران قیمت و اختصاصی واجد کارایی لازم نیز باشد.
در روش ابدایی ما بعد از آماده سازی رسوب سلول باکتریایی، آن را با محلول جدیدی به نام ترانسفورم کننده سلول های مستعد (Competent Transformation Solution) (CTS) مخلوط، پس از اضافه کردن 1 میکرولیتر DNA پلاسمیدی و انکوباسیون در دمای 4 درجه سانتی گراد به مدت 30-5 دقیقه به آن گلوکز اضافه شده و در دمای 37 درجه سانتی گراد انکوبه گردید، سپس عمل کشت سلول ها در پلیت انتخابی LB آگار حاوی 100 میلی مولار کلسیم کلراید انجام شد تا پس از انکوباسیون 18 ساعته کلنی های مربوط به سلول های ترانسفورم شده بر روی پلیت رشد یابند.
در این روش مرحله شوک گرمایی حذف شد ضمن این که کارایی آن بیش تر از انواع روش های معمول محاسبه گردید (107 سلول ترانسفورم شده در هر میکروگرم DNA پلاسمیدی).
روش حاضر به عنوان یک روش ساده و راحت برای تهیه همزمان سلول های مستعد و ترانسفورم سازی معرفی می گردد.