تاثیر غلظت FBS بر انجماد سلول های اسپرماتوگونیای جدا شده از موش نابالغ به روش MACS

جداسازی سلول های اسپرماتوگونیا از موش نابالغ NMRI (national medical research institute) با روش جداسازی مغناطیسی سلولی و بررسی تاثیر غلظت FBS(Fetal Bovine Serum) بر میزان زنده ماندن این سلول ها پس از انجماد.
بیضه جدا شده از موش های 6 روزه نژاد NMRI ابتدا در دو محیط آنزیمی مختلف قرار داده شد. ابتدا 8 تا 9 دقیقه در محیط اول حاوی آنزیم های کلاژناز، تریپسین و DNAseI و پس از شستشو با محیط DMEM/F12 (Dulbecco''s Modified Eagle Medium: Nutrient Mixture F-12) به مدت10 تا 12 دقیقه در محیط دوم حاوی آنزیم های کلاژناز، تریپسین، DNaseI، هیالورونیداز و EDTA(Ethylene Diamine Tetra acetic Acide) قرار گرفت. سپس سوسپانسیون منفرد سلولی به دست آمد. در مرحله بعد سلول ها با استفاده از روش جداسازی (magnetic activated cell sorting) MACS جدا شدند. سپس درصد خلوص این سلول ها به وسیله فلوسایتومتری مشخص شد. در مرحله انجماد، سلول ها به وسیله محیط های انجمادی حاوی محیط KSOM(potassium simplex optimized medium) به علاوه 10 درصد DMSO (Dimethyl sulfoxide)تکمیل شده با 3 غلظت مختلف 50، 60 و 70 درصد از FBS منجمد شد که به ترتیب گروه اول، دوم و سوم نام گرفت.
میزان زنده ماندن سلول ها پس از تیمار آنزیمی 60/0±66/91 درصد و بعد از جداسازی به روش MACS، 33/0±25/95 درصد و میزان خلوص سلول های جداسازی شده 20/2±79/93 درصد بود. میزان زنده ماندن سلول ها پس از انجماد، در گروه اول 15/0±09/ 39 درصد و و در گروه دوم 98/6±55/85 درصد و در گروه سوم 38/1±29/90 درصد بود. این میزان بین گروه اول با گروه های دوم و سوم اختلاف معنی داری نشان داد.
نتایج نشان می دهند که افزایش دما زمان هضم بافت بیضه را در محیط آنزیمی کاهش می دهد. با استفاده از آنتی بادی α6 اینتگرین و دانه های مغناطیسیDynabead میزان بیشتری از سلول ها زنده مانده و با درجه خلوص بالاتری جدا می شوند. همچنین بقای سلول ها در محیط انجمادی حاوی 60 الی 70 درصد FBS افزایش می یابد.