طراحی روش واکنش زنجیرهای پلیمراز مالتیپلکس جهت تشخیص مولکولی باکتری Yersinia pestis

طراحی یک روش تشخیص مولکولی سریع جهت تشخیص باکتری Yersinia pestis با صرف حداقل زمان و هزینه واکنش زنجیرهای پلیمراز (Polymerase Chain Reaction; PCR) بر روی ژنهای ویرولانسirp، caf، pla به صورت مالتیپلکس و یونیپلکس طراحی و انجام شد. پس از تعیین ویژگی به منظور تعیین حساسیت، ابتدا محصول PCR ژنهای pla و cfa در TA کلونینگ وکتور کلون شده و سپس کمترین غلظتی از پلاسمید حامل ژن که بتواند باند واضحی را روی ژل آگاروز ایجاد کند به عنوان حد تشخیص تعیین شد.
نتایج PCR مربوط به سه ژن مذکور در هر دو شکل، به ترتیب قطعاتی با طول bp 00، bp 400 و bp 50 را ایجاد کرد. کمترین تعداد کپی قابل تشخیص مربوط به ژن pla، کپی و برای ژن caf 70 کپی در یک واکنش 5 میکرولیتری به دست آمد. همچنین مثبت شدن واکنش هضم آنزیمی وجود محصولات PCR اختصاصی را تایید کرد.
با توجه به وجود کانون های طاعون خیز در ایران، این مطالعه میتواند در فراهم نمودن ابزار تشخیص مولکولی سریع و مطمئن برای ارزیابی جوندگان به منظور پایش مناطق تحت خطر بسیار موثر باشد. از طرفی روش های طراحی شده در این مطالعه ابزاری دقیق، سریع و کم هزینه برای جستوجو و تشخیص این باکتری در موارد بیوتروریستی فراهم مینماید.