شناسایی پروتئین آنتی ژنی دیکروسلیوم دندریتیکم در گوسفندان آلوده

دیکروسلیازیس یکی از بیماری های انگلی مهم در دام هاست که توسط ترماتودی بنام دیکروسلیوم دندریتیکم ایجاد می شود. تحقیق حاضر با هدف شناسایی آنتی ژن تشخیصی در آلودگی طبیعی گوسفند به دیکروسلیوم دندریتیکم انجام گرفت. برای تهیه دو نوع آنتی ژن بدنی و متابولیک، از کرم های بالغ که از مجاری صفراوی کبدهای آلوده جمع آوری شده بود استفاده شد. عصاره خام ترماتود بالغ متعاقب هموژنیزاسیون و سانتریفوژ بعنوان آنتی ژن بدنی تهیه شد. آنتی ژن دفعی ترشحی هم با انکوباسیون کرم بالغ در شرایط آزمایشگاهی تهیه گردید. نمونه ها ابتدا با روش سدیم دو دسیل سولفات پلی اکریلامید ژل الکتروفورزیس (SDS-PAGE) تحت الکتروفورز و شناسایی پروتئین ها قرار گرفت و سپس آنتی ژن (های) اختصاصی توسط روش وسترن بلاتینگ تعیین هویت شد. بدین منظور آنتی ژن های تهیه شده به کاغذ نیتروسلولز انتقال یافت و سپس با استقرار غشا در بافر مسدود کننده، آنتی بادی اولیه و آنتی بادی کونژوگه در فواصل زمانی مشخص، پروتئین اختصاصی تحت شناسایی قرار گرفت. برای بررسی وجود واکنش متقاطع، آنتی ژن های فاسیولا از هر دو نوع بدنی و دفعی ترشحی، همچنین آنتی ژن کیست هیداتیک و سیستی سرکوس تنیوکولیس هم آزمایش شد. در ایمونو بلاتینگ آنتی ژن های بدنی و دفعی ترشحی کرم بالغ دیکروسلیوم دندریتیکم یک باند با وزن مولکولی 130 کیلودالتون بطور مشترک در هر دو آنتی ژن و در آنتی ژن دفعی ترشحی علاوه بر وجود این باند، شش باند پروتئینی با وزن مولکولی بین 25 تا 60 کیلودالتون توسط سرم مثبت کوسفندان با آلودگی طبیعی مشخص گردید. بنابر یافته های بررسی حاضر، باند پروتئینی با وزن مولکولی 130 کیلودالتون بعنوان آنتی ژن اختصاصی برای تشخیص دیکروسولیازیس در گوسفند معرفی می شود.