کلونینگ اینترفرون لامبدا-1 (اینترکولین-29) انسانی از سلول های دندریتیک مشتق از مونوسیت و بیان آن در سلول هایHEK293T یوکاریوتی

اینترفرون های نوع سه دارای سه لیگاند می باشند: IFN-λ1(IL-29)، IFN-λ2(IL-28A) و IFN-λ3(IL-28B) که این سه لیگاند، گیرنده هترودایمر منحصر به فرد یکسانی را بکار می برند که از زنجیره های C RF2-12 (IFN-λ-R1/IL-28Ra) و CRF2-4(IL10-R-b) تشکیل یافته است. اینترفرون های لامبدا چندین خصوصیت از جمله فعالیت های ضد ویروسی، ضد تکثیری، ایمونومدولاتوری و فعالیت ضد توموری در in vivo را نشان می دهند. هدف این مطالعه کلون کردن ژن IFN-λ1 بدست آمده از سلول های دندریتیک و بررسی تولید پروتئین آن در حامل بیانی یوکاریوتی می باشد.
در این مطالعه آزمایشگاهی، RNA تام از سلول های دندریتیک مشتق شده از مونوسیت تحریک شده با صد ng/ml از LPSاستخراج گردید. cDNA از RNA کل سنتز شد. سپس cDNA مربوط به IFN-λ1 با پرایمرهای اختصاصی توسط PCR تکثیر و در داخل حامل PTZ57R/Tدر اشرشیاکلی سویه DH5α کلون شد. سپس با استفاده از اندونوکلئازهای محدودالاثر KpnI و BamHI به داخل پلاسمید pcDNA3.1+ ساب کلون شد. بعد از انتقال به HEK293T، بیان پروتئین توسط روش ELISA ساندویچی تایید شد.
توالی DNA وارد شده مشابه با توالی کد کننده IFN-λ1 موجود در Gene Bank بود. ژن IFN-λ1 در سلول های ترانسفکت شده رونویسی و بیان آن در سلول های HEk293T توسط الیزای ساندویچی تائید گردید.
کلونینگ و بیان موفق IFN-λ1 می تواند نخستین گام برای تولید و تحقیقات بیشتر درباره فعالیت های این سایتوکاین و فراهم آوردن زمینه های تحقیقاتی برای کسب روش های درمانی جدید برای سرطان، عفونت های ویروسی، بیماری های خود ایمنی و آلرژی و طراحی واکسن های مؤثرتر بکار رود.