کلونینگ و توالی یابی پلاسمید کد کننده پروتئین میکرونم 3 (MIC3) توکسوپلاسما گوندی

توکسوپلاسما گوندی، انگل تک یاخته درون سلولی اجباری و عامل توکسوپلاسموزیس در انسان و حیوانات بوده که در سراسر جهان انتشار دارد. پروتئین میکرونم 3 (MIC3) با وزن ملکولی 90 کیلو دالتون، عامل چسبیدن انگل به سلولهای میزبان در آغاز تهاجم است و در تمام مراحل تکاملی از انگل ترشح شده و یک آنتی ژن قوی محسوب می شود؛ از این نظر علاوه بر ایمونوژن بودن و کاندید ساخت واکسن، در تشخیص نیز کاربرد دارد. هدف از این تحقیق، آماده سازی ژن MIC3 در پلاسمید ناقل جهت ساب کلونینگ در پلاسمیدهای یوکاریوت و پروکاریوت است.

DNA ژنومی توکسوپلاسما، با روش فنل-کلروفرم استخراج شد. با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ژن MIC3، ژن مورد نظر با روش PCR تکثیر شده و با استفاده از ژل آگارز، الکتروفورز گردید. محصول PCR، خالص شده و به کمک آنزیم T4DNA Ligase، به داخل یک وکتور کلونینگ کلون شد. در نهایت پلاسمید نوترکیب به داخل E.coli سوش TOP10 ترانسفورم گردید. با روش های PCR و برش آنزیمی و توالی یابی، کلون مورد نظرتائید شد.

محصول PCR به صورت یک باند 1052 جفت باز در ژل آگارز 1 درصد مشاهده گردید. پلاسمیدهای نوترکیب تحت برش آنزیمی دو آنزیم محدود کننده HindIII و EcoRV قرار گرفت و دو باند 1052 و 2886 جفت باز به دست آمد که نشان داد قطعه MIC3 در پلاسمید pTZ57R/T کلون شده است.

نتایج به دست آمده نشان داد، کلونینگ و ترانسفورم ژن MIC3 در پلاسمید pTZ57R/T با موفقیت انجام شده است.