ژنهایTFRC و ACTB به عنوان ژن مرجع مناسب برای اندازه گیری بیان ژن فعال ساز پلاسمینوژن یوروکیناز (uPA) در سرطان پستان

سرطان پستان شایعترین سرطان در میان زنان در سراسر جهان است. مدتهای طولانی محققان به دنبال یافتن راه هایی برای تشخیص و درمان سرطان در مراحل اولیه بوده اند. تحقیقاتی که به منظور توسعه استفاده از نشانگرهای زیستی صورت گرفته اند در تشخیص و درمان سرطان پستان بسیار موثر بوده و منجر به کاربردی شدن برخی از این نشانگرها در نزد بیماران شده است. روش های جاری در اندازه گیری نشانگرهای زیستی مانند ایمونوهیستوشیمی، ایمونوسیتوشیمی و الایزا روش های مورد تایید و تکرار پذیر در آزمایشگاه های مختلف هستند اما نتایج غیرکمی و مراحل کار متعدد و طولانی از نقاط ضعف این تکنیک ها است که محققان را به جستجو در مورد روش های جایگزین مولکولی مانند (Q-RT-PCR)Quantitative Real-Time PCR تشویق می کند. تایید نهایی اعتبار این روش برای استفاده در آزمایشگاه های تشخیصی نیازمند اعتبارسنجی های متعدد از جمله در مورد ژن های خانه دار (Housekeeping genes) می باشد.
شش ژن خانه دار که به طور معمول در سرطان پستان استفاده شده است (RPLP0، HPRT1، ACTB، GAPDH، GUSB، TFRC)، انتخاب و پایداری بیان آنها برای نرمال کردن بیان ژن uPA، مورد بررسی قرار گرفت. واکنش Q-RT-PCR با استفاده از Master Mix 2x از شرکت PrimerDesign در واکنش های 20 میکرولیتری انجام شد. غلظت نهایی پرایمرها و پروب ها به ترتیب 5/0 میکرومولار و 3/0 میکرومولار بود. اندازه گیری میزان فلورسانت توسط دستگاه Applied Biosystems 7500 و آنالیز داده ها توسط نرم افزار 7500 software system ver.2.0 انجام شد. به منظور یافتن پایدارترین ژن خانه دار، داده ها ابتدا توسط نرم افزار Excel به مقیاس خطی تبدیل شد. سپس داده ها توسط نرم افزار geNorm [20] با روش Pair wise comparison و با استفاده از نرم افزار NormFinder [22] با روش combined estimate of The intra and inter group validation آنالیز شد.
در این مطالعه RPLP0 و GAPDH بیشترین مقدار M و TFRC کمترین مقدار را داشت. (شکل 1) در این مطالعه TFRC بیشترین پایداری بیان را نشان داد. در این مطالعه میزان V برای استفاده از سه و چهار کنترل داخلی به ترتیب 5/0 و 4/0 بود.
بر اساس این مطالعه ژن TFRC، پایدارترین ژن کنترل و ترکیب TFRC و ACTB بهترین ترکیب دو ژنی برای نرمال سازی uPA در سرطان پستان است. لازم به ذکر است که ژنهای RPLP0 و GAPDH به عنوان رفرانس مناسب توصیه نمی شود.