مطالعه بیان پروتئین core+1 ویروس هپاتیت C توسط روش میکروسکوپی هم کانون

پروتئین جدیدی تحت عنوان پروتئینF یاcore+1 شناخته شده است که توسط ژنوم ویروس هپاتیت C (HCV) کد می شود. عملکرد این پروتئین هنوز مشخص نشده است، اما به نظر می رسد در سیکل زندگی و بیماری زایی ویروس قش مهمی را داشته باشد. در این مطالعه کلون کردن و بیان ژن HCV core+1 در سیستم یوکاریوتی مورد بررسی قرار گرفت تا نقش این پروتئین در مسیرهای سیگنالینگ سلولی و مقاومت ویروس به درمان بررسی گردد.

ابتدا ژن core+1 داخل پلاسمید pIVEX2.3 به عنوان یک ناقل پروکاریوتی کلون شد. در ادامه توالی نوکلئوتیدی 6XHis-tag core+1 حاصل از واکنش زنجیره ای پلی مراز (PCR) در سایت های آنزیمی NheI/BamHI داخل وکتور یوکاریوتی pcDNA3.1(+) کلون شد. این پلاسمید به وسیله تجزیه آنزیمی و توالی یابی مورد تائید قرار گرفت. پس از ساخته شدن رده سلول کبدی Huh7 به وسیله روش الکتروپوریشن و لیپوفکشن ترانسفکت شدند. با ترانسفکشن هم زمان پلاسمید pEGFP-N1 و با تکنیک فلوسایتومتری بازده ترانسفکشن مورد بررسی قرار گرفت. در نهایت بیان و چگونگی استقرار پروتئین core+1 در سلول توسط میکروسکوپ هم کانون ارزیابی شد.

نتایج هضم آنزیمی و تعیین توالی صحت مراحل کلونینگ را نشان داد. آنالیز فلوسایتومتری بازده بالای روش الکتروپوریشن را در مقایسه با لیپوفکشن برای ترانسفکشن سلول های Huh7 نشان داد. هم چنین بیان پروتئین core+1 در سلول های Huh7 با استفاده از آنتی بادی anti-His و میکروسکوپ هم کانون مورد تائید قرار گرفت.

نتایج این پژوهش بیان یوکاریوتی پروتئین core+1 در سلول های Huh7 را نشان داد که به این ترتیب می تواند که ابزار مناسبی را برای مطالعه نقش تداخلی پروتئین در مسیرهای سیگنالینگ سلولی و برهم کنش آن با سایر پروتئین ها در اختیار ما قرار دهد.