ساخت وکتور ریپورتر القایی لوسیفراز برای ردیابی فعالیت ویروس HTLV-1

ویروس HTLV-1 ((Human T_cell lymphotropic virus type با حدود 20 میلیون نفر آلوده در جهان یک مشکل بهداشت جهانی است که در مناطقی مثل ژاپن و خراسان ایران اندمیک است. این ویروس عامل بیماری پیشرونده لوسمی سلول های T بزرگسالان (ATL) می باشد که دارویی تائید شده موثر بر علیه آن تاکنون وجود ندارد. به دلیل خصوصیات غیر سیتولیتیکی و انتقال سلول به سلول این ویروس، مطالعات دارویی در کشت سلولی بر روی این ویروس با روش های معمول در آزمایشگاه In vitro)) کم بوده و منحصر به چند رده سلولی آلوده به آن می باشد. بنابراین ساخت وکتور ریپورتر برای ارزیابی عفونت ویروس HTLV1 در کشت سلولی به جهت مطالعات دارویی ضروری به نظر می رسد. ریپورتر های ساخته شده برای رتروویروس ها معمولا بر اساس ترانس اکتیویشن ناحیه LTR می باشد. ناحیه LTR در ژنوم ویروس شامل پروموترویروس است که در تکثیرو نسخه برداری آن، تحت تاثیر پروتئین ویروسی Tax نقش دارد.
منطقه پروموتری LTR ویروس با استفاده از آنزیم محدود کننده از پلاسمید pUCLTR-Lacz بریده و در وکتور بدون پروموتر pGL4.17 که حامل ژن ریپورتر لوسیفراز است در بالادست ژن لوسیفرازساب کلون شد. ابتدا کلونینگ با colony PCR، هضم آنزیمی وتعیین توالی تایید شد. سپس سلول T293 باوکتور نوترکیب ترانسفکت شد وبیان القایی لوسیفراز مورد تایید قرار گرفت.
وکتور نوترکیب تولید شده درسلول T293 پس از کوترانسفکت با وکتور بیانیTax باعث بیان قابل ملاحظه ی لوسیفراز تا 50 برابر درسلول های مورد آزمایش نسبت به کنترل شد.
با توجه به قابلیت بالای وکتور نوترکیب تولید شده، می تواند درمطالعات بعدی درساخت رده سلولی نشانگر برای ویروس HTLV-1، به جهت مطالعات پایه ای و دارویی به کار رود.