بیان کاست ژنی SO6-STxB در باکتری اشرشیا کلی و بررسی تیترآنتی بادی

یکی از راه های تقویت اثر واکسن ها استفاده از یاور ها می باشد. STxB باکتری شیگلا دارای نقش یاوری و حاملی بوده و می توان با ترکیب کردن آنتی ژن های کاندیدای واکسن با این یاور به تولید واکسن مناسب پرداخت. غاسول صابونی گیاهی دارای فعالیت ان-گلیکوزیداز می باشد. ایزوفرم 6 این گیاه (SO6)، آدنین 4324 را در توالی حفاظت شده GAGA در 28SrRNA پورین زدایی کرده و سنتز پروتئین را مختل می کند. هدف این مطالعه، بیان ژن SO6-STxB در باکتری اشرشیا کلی و بررسی تیتر آنتی بادی آن در موش می باشد. در این مطالعه تجربی ژن SO6 با جایگاه های آنزیمی BamHI و SalI از پلاسمید pUC57 جداسازی گردید و در وکتور بیانی pET28a(+) حاوی ژن STxB زیرهمسانه سازی و به باکتری اشرشیا کلی سویه BL21(DE3) تراریخت شد. بیان پروتئین نوترکیب SO6-STxB توسط IPTG القا و تخلیص به وسیله کروماتوگرافی تمایلی ستون نیکل انجام گردید. تایید پروتئین نوترکیب با استفاده از وسترن بلات انجام گرفت. موش ها به صورت صفاقی با پروتئین تخلیص شده واکسینه شدند و تیتر IgG سرم به روش ELISA مورد سنجش قرار گرفت. زیرهمسانه سازی ژن STxB-SO6 در وکتور بیانی pET28a(+) به وسیله واکنش PCR و هضم آنزیمی، تائید شد. پروتئین نوترکیب 5/37 کیلودالتونی تولید شده به وسیله SDS-PAGE و لکه گذاری وسترن تایید شد. سپس آنتی بادی تولید شده از سرم موش جداسازی و توسط الایزا اندازه گیری گردید. آنتی ژن STxB-SO6 نوترکیب تخلیص شده می تواند برای تحقیقات ضد سرطانی و کاندید واکسن استفاده شود.