کلونینگ و بیان آنتاگونیست گیرنده ی اینترلوکین 1 نوترکیب انسانی در سیستم های بیانی Escherichia coli شامل (DE3) Bl21، (DE3) Origami و (DE3) Rosetta

 آنتاگونیست گیرنده ی اینترلوکین 1 (IL-1RA)، پروتئینی 153 آمینواسیدی (با وزن مولکولی 83/16 کیلودالتون) است. این پروتئین دارویی، با نام تجاری آناکینرا شناخته شده است و کاربرد موثری در درمان آرتریت روماتوئید دارد. این مطالعه، به منظور بررسی بیان پروتئین نوترکیب آنتاگونیست گیرنده ی اینترلوکین 1 در سویه های باکتری Escherichia coli (E. coli) انجام شد.

 بهینه سازی ژن IL-1 RA با استفاده از GenScript انجام شد و در پلاسمید pUC18 به عنوان وکتور کلونینگ، قرار گرفت. سپس، این پلاسمید با دو آنزیم محدود کننده ی NdeI و BamHI برش خورد. ژن IL-1RA از روی ژل تخلیص شد. ژن IL-1RA به داخل وکتور بیانی وارد شد. سازه ی کاست بیانی به داخل باکتری های E. coli Origami، E. coli BL21 و E. coli Rosetta با روش کلرید کلسیم (CaCl2</sub>) و شوک حرارتی منتقل شد.

تشخیص و تایید کلنی های منتقل شده با Colony polymerase chain reaction (Colony PCR) انجام شد. القای این ژن با به کار گیری Isopropyl β- d-1-thiogalactopyranoside (IPTG) انجام گرفت. بیان پروتئین با استفاده از روش های Western blotting و Sodium dodecyl sulfate-Polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) تایید شد و به وسیله ی رزین نیکل تخلیص گردید. آنالیز بیانی سوش های E. coli ترانسفورم شده تایید کرد که ورود سازه به داخل وکتور بیانی انجام شده است. وزن مولکولی پروتئین بیان شده، 83/16کیلو دالتون برآورد شد.

در این مطالعه، آنتاگونیست گیرنده ی اینترلوکین 1 انسانی در باکتری E. coli Origami با مقادیر بالا نسبت به سویه های دیگر E. coli، به طور موفقیت آمیزی تولید شد. باکتری E. coli Origami می تواند به عنوان میزبان مناسب در تولید IL-1RA نوترکیب انسانی مورد استفاده قرار گیرد و این فن آوری قابلیت بومی سازی دارد.