بیان پری پلاسمیک یک دیابادی جدید برای هدف قرار دادن همزمان دو نقطه ی وارسی سیستم ایمنی PD-1 و CTLA-4

مطالعات بالینی نشان داده است که مصرف همزمان دو مهارکننده ی مختلف نقاط وارسی ایمنی، نیولومب و ایپیلیمومب، به صورت معنی داری ایمنی و کارآیی درمانی بهتری در مقایسه با مصرف هر کدام به تنهایی داشته است. دیابادی ها آنتی بادی های مهندسی شده با اختصاصیت دوگانه هستند که همزمان دو آنتی ژن مختلف را مورد هدف قرار می دهند و می توان آن ها را در سیستم بیان باکتریایی تولید کرد. هدف مطالعه ی حاضر، تولید یک دیابادی جدید برای هدف قرار دادن همزمان دو نقطه ی وارسی سیستم ایمنی در فضای پری پلاسم باکتری اشرشیا کولای بود.

توالی آمینو اسید دیابادی بر اساس نواحی متغیر آنتی بادی های نیولومب و ایپیلیمومب طراحی شد و کد ژنتیکی آن برای بیان در سیستم باکتری بهینه سازی و بعد از ساخت شیمیایی در پلاسمید، pET-22b وارد گردید. بیان پروتیین در باکتری ای کولای BL21 (DE3) در دماها و غلظت های مختلف القاگر انجام شد. بعد از استخراج پروتیین پری پلاسمیک، خالص سازی دیابادی با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی نیکل انجام گردید.

نتایج SDS-PAGE بیان پروتیین با وزن حدود 55 کیلودالتون را تایید کرد. بیشترین میزان پروتیین محلول در دمای 23 درجه ی سانتی گراد و غلظت 1 میلی مولار القاگر (IPTG) حاصل شد. پروتیین محلول بیان شده توسط کروماتوکرافی تمایلی با خلوص بالای 90 درصد با موفقیت خالص سازی شد.

نتایج مطالعه ی ما نشان داد که بهینه سازی شرایط بیان، می تواند منجر به بهبود بیان محلول پروتیین های مشابه در فضای پری پلاسمیک شود.