تشخیص سریع مولکولی لیستریامنوسیتوژنز به روش PCR با استفاده از ژن hlyA

در حال حاضر روش استاندارد برای تشخیص لیستریا مونوسیتوژنز کشت می باشد. به علت این که در خوراک دام از آنتی بیوتیک استفاده می شود و این باکتری داخل سلولی می باشد حساسیت کشت به شدت کاهش می یابد. به علاوه، تشخیص با این روش بیشتر از 36 ساعت طول می کشد. لذا، دست یابی به آزمونی که بتواند در هر شرایطی وجود لیستریا مونوسیتوژنز را در نمونه بالینی نشان دهد، ارزشمند می باشد. هدف این مطالعه تشخیص سریع مولکولی لیستریا مونوسیتوژنز به روش PCR با استفاده از ژن hlyA بود.
ژن hlyA به عنوان ژن اختصاصی برای شناسایی لیستریا مونوسیتوژنز انتخاب گردید. به منظور بهینه سازی آزمایش از سویه استاندارد لیستریا مونوسیتوژنز PTCC: 1163 استفاده شد. برای بررسی اختصاصیت از باکتری های سالمونلا تیفی PTCC: 1609، لیستریا مونوسیتوژنز PTCC: 1163 و اشریشیاکلی ATCC: 35218، استفاده شد. برای استخراج DNA از روش فنل - کلروفرم استفاده شد و محصول 210bp پس از الکتروفورز در ژل آگارز %1 در دمای اتاق با رنگ اتیدیوم بروماید رنگ آمیزی و مورد شناسایی قرار گرفت.
نتایج این مطالعه نشان داد که سویه استاندارد محصول مورد نظر را تولید می نماید. در حقیقت، جفت پرایمر انتخاب شده محصولی در اندازه 210bp تولید می کند. آزمایش اختصاصیت نشان داد که روش حاضر با هیچ یک از باکتری های غیرهدف واکنش نشان نمی دهد. بررسی حساسیت نشان داد که حد نهایی تشخیص DNA لیستریا مونوسیتوژنز در این روش 500fg می باشد.
نتایج بهینه سازی نشان داد که روش PCR به کار رفته در این مطالعه از سرعت، حساسیت و اختصاصیت لازم برخوردار است و نتیجه نهایی در کمتر از سه ساعت بدست می آید. به کارگیری این روش در آزمایشگاه ها تشخیص لیستریا مونوسیتوژنز را امکان پذیر می نماید