فهرست مطالب افسانه حداد دیلمی
-
سابقه و هدف
کمبود گروههای خونی سیستم ABO یکی از مشکلات متداول مراکز انتقال خون در دنیا میباشد. هم ز مان با پیشرفت علم مهندسی ژنتیک و تخلیص پروتیینها، تبدیل آنتیژنهای A و B به آنتیژن O و ایجاد گروه خونی واحد مطرح شد. هدف از این پژوهش، بیان ژن آلفا گالاکتوزیداز در میزبان پروکاریوتی E.coli با ایجاد تغییرات پس از ترجمه و در نهایت تبدیل آنتیژن B گروه خونی به آنتیژن O بود.
مواد و روش هادر این مطالعه تجربی، ژن آلفا گالاکتوزیداز دانه قهوه که پس از بهینهسازی کدونها در پلاسمید pBHA حاوی جایگاه برش آنزیمهای BamH1 و Nco1 کلون شده بود، در باکتری E.coli سویه TOP10 تکثیر و استخراج شد. ژن آلفا گالاکتوزیداز پس از برش با آنزیم های فوق و تخلیص روی ژل آگاروز مجددا در پلاسمید بیانی pET-20b کلون شده و به باکتری E.coli سویه rosetta 2 (DE3) وارد شد. بیان ژن با استفاده از القاکننده IPTG انجام شد. وجود پروتیین تولیدی با استفاده از SDS-PAGE و وسترن بلات بررسی شد. آزمون عملکرد پروتیین نیز با توانایی تبدیل گلبولهای B به O ارزیابی شد.
یافته هاوسترن بلات و SDS-PAGE وجود پروتیین در پری پلاسم باکتری را تایید کرد. آنزیم تخلیص شده توانست آنتیژن B را به طور نسبی از گلبول قرمز حذف کرده و میزان آگلوتیناسیون با آنتیسرم B را به میزان زیادی کاهش دهد.
نتیجه گیریبیان پروتیین یوکاریوتی در میزبان پروکاریوتی میتواند در تولید انبوه آنزیم گالاکتوزیداز برای کاربرد در مراکز انتقال خون کارگشا باشد. بهینه سازی شرایط مختلف بیان برای دستیابی به مقادیر کافی از آنزیم ضروری میباشد.
کلید واژگان: گروه خونی, گالاکتوزیداز, E.coli}Background and ObjectivesThe shortage of different ABO blood groups is a permanent problem that many blood transfusion centers encounter. The conversion of blood group A and B to group O is a solution to this problem. In this research we aimed to clone and express the α-galactosidase enzyme gene to convert the blood group B to O.
Materials and MethodsIn this experimental study, the α-galacosidase gene from coffee bean was codon-optimized and cloned into the pBHA plasmid. After replication in E. coli, plasmid was cut with BamH1 and Nco1 restriction enzymes and the α-galacosidase gene was purified by gel electrophoresis. The gene was then cloned into the expression vector, pET-20b. The expression construct was introduced into E. coli Rosetta 2 (DE3) and the expression of the enzyme was induced by IPTG. The presence of protein production was investigated using SDS-PAGE and Western blotting. Protein function test was also evaluated by the ability of B cells to convert to O cells.
ResultsThe presence of the recombinant protein was confirmed by SDS-PAGE and Western blot assay. The purified protein could partially convert blood group B RBCs into group O as detected by decreasing the agglutination strength with B antiserum from 4+ to less than 1+.
ConclusionsThe production of eukaryotic proteins in a prokaryotic host is a major step in mass production. Optimization of different expression conditions is essential to achieve sufficient amount of enzyme.
Keywords: Blood Group, Galactosidase, E coli}
- در این صفحه نام مورد نظر در اسامی نویسندگان مقالات جستجو میشود. ممکن است نتایج شامل مطالب نویسندگان هم نام و حتی در رشتههای مختلف باشد.
- همه مقالات ترجمه فارسی یا انگلیسی ندارند پس ممکن است مقالاتی باشند که نام نویسنده مورد نظر شما به صورت معادل فارسی یا انگلیسی آن درج شده باشد. در صفحه جستجوی پیشرفته میتوانید همزمان نام فارسی و انگلیسی نویسنده را درج نمایید.
- در صورتی که میخواهید جستجو را با شرایط متفاوت تکرار کنید به صفحه جستجوی پیشرفته مطالب نشریات مراجعه کنید.