جستجوی مقالات مرتبط با کلیدواژه "vitrification" در نشریات گروه "زیست شناسی"
تکرار جستجوی کلیدواژه «vitrification» در نشریات گروه «علوم پایه»-
انجماد یک روش نگه داری طولانی مدت تخمک می باشد که در روش های کمکی باروری نقش مهمی دارد. هدف از مطالعه حاضر بررسی اثر دو محلول انجمادی و دوستاکسل بر تغییر بیان ژن های اتوفاژی همچون Atg5 و Beclin-1 در تخمک MII موش سوری پس از انجماد شیشه ای با روش کرایوتاپ می باشد. برای رسیدن به این هدف، تخمک های MII موش سوری جمع آوری شده و در دو غلظت متفاوت از محلول های انجمادی اتیلن گلیکول 15%، دی متیل سولفوکساید 15% و سوکروز 5/0 مولار در گروه (VS1) A و اتیلن گلیکول 5/7 %، گلیسرول 5/7 % و سوکروز 5/0 مولار در گروه (VS2) B منجمد شدند و برخی از گروه ها قبل از انجماد تحت تاثیر دوستاکسل قرار گرفتند. پس از ذوب، تخمک ها لقاح داده شدند. درصد زنده مانی و لقاح تخمک های منجمد و ذوب شده ارزیابی و تغییر بیان ژن های (Atg5 و Beclin-1) با روش RT-PCR بررسی شد. نتایج نشان داد تفاوت های معنی داری بین درصد بقا و درصد لقاح گروه های انجمادی در مقایسه با گروه کنترل وجود دارد (P<0.05). درصد زنده مانی و لقاح در گروه VS1 نسبت به گروه VS2 کاهش یافت. همچنین درصد زنده مانی و لقاح گروه های پیش انکوبه شده با دوستاکسل بیشتر از گروه های انکوبه نشده بود. این مطالعه نشان داد انجماد شیشه ای با کرایوتاپ، ترازهای نسخه برداری ژن های اتوفاژی را در اووسیت های MII منجمد ذوب شده تغییر می دهد همچنین پیش انکوبه کردن اووسیت با دوستاکسل قبل از انجماد شیشه ای می تواند تراز نسخه برداری Atg5 و Beclin-1 را در گروه های آزمایشی کاهش دهد و در بالا بردن درصد بقا و درصد تشکیل جنین های دو سلولی موثر واقع شود.
کلید واژگان: انجماد شیشه ای, تخمک, دوستاکسل, کرایوتاپ, Atg5 و Beclin-1 Freezing is a long-term egg storage method that plays an important role in assisted reproductive methods. The aim of the present study is to investigate the effect of freezing solutions and docetaxel on the expression changes of autophagy genes such as Atg5 and Beclin-1 in mouse MII oocytes after glass freezing by cryotop method. To achieve this goal, mouse MII oocytes were collected and frozen in two different concentrations of 15% ethylene glycol, 15% dimethyl sulfoxide and 0.5 M sucrose in group A (VS1) and 7.5% ethylene glycol, glycerol. 7.5% and 0.5 M sucrose were frozen in group B (VS2) and some groups were affected by docetaxel before freezing. After thawing, the eggs were fertilized.The percentage of survival and fertilization of frozen and thawed oocytes was evaluated and the expression changes of genes (Atg5 and Beclin-1) were investigated by RT-PCR method. The results showed that there are significant differences between the percentage of survival and the percentage of fertilization in the freezing groups compared to the control group (P<0.05). The percentage of survival and fertilization in the VS1 group decreased compared to the VS2 group. Also, the percentage of survival and conception of the groups pre-incubated with Docetaxel was higher than the non-incubated groups. This study showed that vitrification with cryotop changes the transcript levels of autophagy genes in frozen-thawed MII oocytes, and pre-incubation of oocytes with docetaxel before vitrification can decrease the transcript levels of Atg5 and Beclin-1 in the experimental groups and above Increase the percentage of survival and the percentage of formation of two-celled embryos.
Keywords: vitrification, oocyte, docetaxel, Cryotop, ATG5, Beclin-1 -
زمینه و هدف
پژوهش حاضر به منظور بررسی مقایسه ای تاثیر ماده دوستاکسل بر روی لقاح آزمایشگاهی، درصد زنده مانی و داربست سلولی تخمک ها پس از انجماد شیشه ای با دو ماده انجمادی متفاوت می باشد.
روش کاربرای رسیدن به این منظور موش های ماده نژاد NMRI با سن 8 تا 10 هفته با تزریق هورمون های PMSG و HCG برای تخمک گذاری تحریک شدند. توده سلولی کومولوس اطراف تخمک با استفاده از آنزیم هیالورونیداز 1/0% برداشته و سپس تخمک ها به 8 گروه آزمایشی شامل گروه های کنترل، دوستاکسل، دوستاکسل+ محلول انجمادی1، دوستاکسل+ محلول انجمادی2، دوستاکسل+ انجماد شیشه ای 1، دوستاکسل+ انجماد شیشه ای2، انجماد شیشه ای 1 و انجماد شیشه ای 2 تقسیم گردیدند. تخمک های بالغ در محلول های انجمادی اتیلن گلیکول و دی متیل سولفوکساید با غلظت 15 درصد و ساکارز 5/0 مولار در گروه انجمادی 1 و محلول های انجمادی اتیلن گلیکول 5/7 %، گلیسرول 5/7 % و سوکروز 5/0 مولار در گروه انجمادی دوم منجمد شدند. پس از ذوب شدن، درصد زنده مانی و لقاح آن ها تا مرحله دو سلولی بررسی گردید. رنگ آمیزی میکروتوبول ها در تخمک ها با آنتی بادی آلفاتوبولین انجام گردید.
یافته هانتایج نشان می دهد تفاوت های معنی داری بین درصد زنده مانی و درصد لقاح گروه های انجمادی در مقایسه با گروه کنترل وجود دارد (P<0.05). درصد زنده مانی و درصد لقاح در گروه انجمادی اول نسبت به گروه انجمادی دوم کاهش یافت اما این دو گروه از نظر آماری تفاوت معنی داری بایک دیگر نداشتند. هم چنین درصد زنده مانی و درصد لقاح گروه های پیش انکوبه شده با دوستاکسل بیشتر از گروه های انکوبه نشده بود
نتیجه گیریبا توجه نتایج حاصل دوستاکسل با کاهش آسیب های وارده به اسکلت سلولی تخمک می تواند در بهبود تکنیک های تولید مثلی موثر باشد.
کلید واژگان: انجماد شیشه ای, تخمک, محلول انجمادی, دوستاکسل, کرایوتاپInroduction & ObjectiveThe aim of the present study was to investigate the effect of docetaxel on the survival rate and in vitro fertilization of oocytes after vitrification by two cryopreservation solution.
Materials and MethodsFor this NMRI mice (8-10 weeks old) were superovulated by injecting PMSG and HCG. Oocytes are surrounded by cumulus and corona cells and must be denuded by 0.1% hyaluronidase enzyme. The oocytes were then divided into 8 experimental groups including control, docetaxel, docetaxel + vitrification 1 solution; docetaxel + vitrification1; vitrification1; docetaxel + vitrification 2 solution; docetaxel + vitrification2; vitrification2. Mature oocytes were vitrified in ethylene glycol and dimethyl sulfoxide solutions at 15% concentration and 0.5 M sucrose in cryopreservation solution1 and ethylene glycol and glycerol at 7.5 concentration and 0.5 M sucrose in cryopreservation solution2. After thawing, their survival and fertilization rates were assessed up to the two-cell stage. Staining of the microtubules in the oocytes was performed with alpha-tubulin antibody.
ResultsThe results showed a significant difference in survive and fertilization rates compared to the control group (P<0.05). The rate of survival and formation of 2-cell embryos in the first cryopreservation group decreased compared to the second cryopreservation group but the two groups were not statistically significant. The results showed that survival and fertilization rates in pre-incubated groups with docetaxel were higher than non-incubated groups.
ConclusionDocetaxel could improve reproductive techniques by reducing the damage to the oocyte cytoskeleton.
Keywords: Vitrification, oocytes, cryopreservation solution, Docetaxel, cryotop -
دوستاکسل به عنوان یک عامل پایدارکننده می تواند به طور بالقوه آسیب وارد شده به اسکلت سلولی تخمک را در طول انجماد شیشه ای کاهش دهد. هدف از مطالعه حاضر بررسی تاثیر داروی دوستاکسل بر روی درصد بقا و لقاح آزمایشگاهی تخمک ها پس از انجماد شیشه ای می باشد. موش های ماده نژاد NMRI با سن 8 تا 10 هفته با تزریق هورمون های PMSG و HCGتحریک تخمک گذاری شدند. با استفاده از آنزیم هیالورونیداز 1/0% توده سلولی کومولوس اطراف تخمک برداشته شد. سپس تخمک ها به 5 گروه آزمایشی شامل گروه های کنترل، دوستاکسل، دوستاکسل+ محلول انجمادی، دوستاکسل+ انجماد شیشه ای و انجماد شیشه ای تقسیم شدند. تخمک های بالغ در محلول های انجمادی اتیلن گلیکول و دی متیل سولفوکساید با غلظت 15 درصد و ساکارز 5/0 مولار منجمد شدند. پس از ذوب، درصد بقا و لقاح آنها تا مرحله دو سلولی بررسی گردید. رنگ آمیزی میکروتوبول ها در تخمک ها با آنتی بادی آلفاتوبولین انجام شد. میزان لقاح هر گروه در مقایسه با گروه کنترل کاهش قابل توجهی نشان داد (001/0=P). میزان تشکیل جنین های دو سلولی در هر دو گروه انجمادی (دوستاکسل+ انجماد شیشه ای و انجماد شیشه ای) به طور قابل توجهی نسبت به غیرانجمادی کنترل (001/0=P) و دوستاکسل (004/0=P) پایین تر بود. نتایج نشان داد درصد بقا و لقاح در گروه های پیش انکوبه شده با دوستاکسل بیشتر از گروه های انکوبه نشده بود، بنابراین دوستاکسل با کاهش آسیب های وارده به اسکلت سلولی تخمک می تواند در بهبود تکنیکهای تولید مثلی موثر باشد.
کلید واژگان: انجماد شیشه ای, تخمک, دوستاکسل, کرایوتاپAs a stabilizing agent, docetaxel can potentially reduce the damage to the oocyte cytoskeleton during vitrification. The aim of the present study was to investigate the effect of docetaxel on the survival rate and in vitro fertilization of oocytes after vitrification. NMRI mice (8-10 weeks old) were superovulated by injecting PMSG and HCG. Oocytes are surrounded by cumulus and corona cells and must be denuded by 0.1% hyaluronidase enzyme. The oocytes were then divided into 5 experimental groups including control, docetaxel, docetaxel+vitrification solution; docetaxel+ vitrification and vitrification. Mature oocytes were vitrified in ethylene glycol and dimethyl sulfoxide solutions at 15% concentration and 0.5 M sucrose. After thawing, their survival and fertilization rates were assessed up to the two-cell stage. Staining of the microtubules in the oocytes was performed with alpha-tubulin antibody. The fertilization rate of each group showed a significant decrease compared to the control group (P=0.001). The rate of formation of 2-cell embryos in both vitrified groups (docetaxel+ vitrified and vitrified vitrified) was significantly lower than non-vitrified (control (P=0.001) and docetaxel ((P=0.004)). The results showed that survival and fertilization rates in pre-incubated groups with docetaxel were higher than non-incubated groups, so docetaxel could improve reproductive techniques by reducing the damage to the oocyte cytoskeleton.
Keywords: Cryotop, docetaxel, oocytes, vitrification -
در این تحقیق، حفاظت انجمادی به روش شیشه ای شدن بذر کنجد با دو نوع محلول حفاظت کننده PVS2 و PVS3در هفت سطح زمانی (20، 40، 60، 80، 100، 120 و 140 دقیقه) صورت پذیرفت. این آزمون به صورت فاکتوریل در قالب طرح کاملا تصادفی (CRD) با دو فاکتور محلول حفاظت کننده (دو سطح) و سطوح زمانی (هفت سطح) و سه تکرار انجام شد. نتایج حاصل از تجزیه واریانس برای زمان تیمار و نوع محلول جهت سه صفت درصد جوانه زنی، طول ریشه چه و طول ساقه چه در سطح احتمال یک درصد (P<0.01) معنی دار مشاهده گردید. اثر متقابل زمان تیمار در نوع محلول برای صفت طول ریشه چه و طول ساقه چه در سطح احتمال یک درصد (P<0.01) و برای صفت درصد جوانه زنی در سطح احتمال پنج درصد (P<0.05)معنی دار بود. بطورکلی نتایج تجزیه واریانس، نوع محلول حفاظت کننده و سطوح زمانی تیمار در فرآیند شیشه ای شدن و حفاظت انجمادی گیاه کنجد در شاخص های مورد ارزیابی را موثر نشان داد.کلید واژگان: روغن, مواد ضدانجماد, شیشه ای شدنIn this research was performed, cryopreservation to method vitrification with two types of solution protecting PVS2 and PVS3 in 7 times (20, 40, 60, 80, 100, 120 and 140 minutes). This experiment factorial was studied in the form of with completely randomized design (CRD) with two factors protective solution (two level) and time levels (seven level) and three replications. The results of analysis of variance for treatment time and soluble type in three traits, percentage germination, root and shoot length was significant at the level of 1% (P<0.01). Interaction between the time treatment in solution type for the length of root and shoot length were significant at the level of 1% (P<0.01) for germination percentage was insignificant at the level of 5% (P<0.05). Overall, analysis of variance showed that is effective the protective solution type and levels of treatment time in the process of vitrification and the cryopreservation Sesame plant in assessment indicators.Keywords: Oil, Cryoprotectants, Vitrification
-
بهینه سازی فرایند انجماد شیشه ای، به عنوان راهکاری جهت ذخیره ی رویان های حاصل از تکنیک های کمک باروری، مستلزم تقابل با عوامل مخربی از قبیل تشکیل کریستال های یخ، سمیت سلولی و شوک اسمزی است که رویان را در معرض شرایط نا مساعد قرار می دهند. حضور کربوهیدرات ها به عنوان مواد سرما محافظ نفوذ نا پذیر، تلاشی در راستای کاهش این تنش ها می باشد. از آن جایی که استفاده ی ترکیبی از قندها نتایج بهتری را در پی داشته، در این طرح، از عسل طبیعی که متشکل از مونو ساکارید ها و دی ساکارید های مختلف است به عنوان ماده ی سرمامحافظ جایگزین ساکارز، در انجماد بلاستوسیست موش استفاده شد. بدین منظور بلاستوسیست های درون تنی موش پس از استحصال، به طور تصادفی به دو گروه انجمادی عسل و ساکارز تقسیم گشتند. در بخش اول آزمایش، بلاستوسیست ها تحت انجماد با محیط های حاوی غلظت های مختلف عسل قرار گرفتند و در نهایت غلظت های بهینه تعیین شدند. بخش دوم به مقایسه ی تاثیر محلول های انتخاب شده و محیط های حاوی ساکارز بر نرخ زنده مانی، خروج از زونا و لانه گزینی اختصاص یافت. در بخش اول، غلظت های بهینه ی 1 و 2 مولار به ترتیب در محیط انجماد و ذوب برگزیده شدند. نتایج حاصل از بخش دوم آزمایش نشان داد که استفاده از عسل طبیعی نه تنها در میزان زنده مانی توانست با گروه ساکارز برابری نماید، بلکه قادر به حفظ نرخ خروج از زونا و مهم تر از آن لانه گزینی در سطح گروه ساکارز نیز بود. با توجه به نتایج حاصل از این تحقیق می توان عسل طبیعی را به عنوان ماده ی سرمامحافظ نفوذ ناپذیر مناسبی جهت جایگزینی با ساکارز و بهینه سازی روند انجماد معرفی کرد.کلید واژگان: انجماد شیشه ای, مواد سرما محافظ نفوذ نا پذیر, عسل طبیعی, بلاستوسیست موشVitrification process optimization, as a way to store embryos derived from assisted reproductive techniques, requires dealing with several destructive factors. The presence of carbohydrates as non-permeating cryoprotectants is an attempt in order to reduce these stresses. Since the combination use of sugars leads to better results, in this project, natural honey which consists of various monosaccharides and disaccharides was applied as an alternative to sucrose in mouse blastocyst vitrification. For this purpose, the first part of the experiment was conducted to determine the optimum concentration of honey in vitrification and warming solutions. The second part was designed to compare the effect of honey-based selected solutions and sucrose-based one in terms of survival, hatching and implantation rate. Among different concentrations of honey, optimum concentrations of 1 and 2 M were chosen for vitrification and thawing mediums, respectively. Results of the second part demonstrated that, not only the survival rate can be equal with sucrose when using honey, but it also brings about as good results as the sucrose-based group regarding the hatching rate and more importantly the implantation rate. Therefore, we can introduce natural honey, as an appropriate substitute for sucrose to optimization the vitrification process.Keywords: Vitrification, Non-permeating, Cryoprotectant, Natural honey, Mouse blastocyst
-
انجماد رویان در مراحل مختلف تکوینی شامل زیگوت، مراحل اولیه ی تسهیم و بلاستوسیست، یکی از بخش های اصلی در اکثر برنامه های لقاح آزمایشگاهی است. به دلیل هماهنگی بهتر اندومتر و رویان و نیز نرخ لانه گزینی بالاتر بلاستوسیست، انجماد آن نسبت به سایر مراحل در ارجحیت قرار دارد. با این وجود حضور مایع درون حفره ی بلاستوسل و نیز تشکیل کریستال یخ، انجماد آن را با محدودیت روبرو ساخته است. لذا در این مطالعه، با خارج ساختن این مایع با کمک تکنیک سوراخ نمودن مصنوعی و بررسی کیفیت بلاستوسیست از لحاظ سلولی و مولکولی، علاوه بر بهبود انجماد بلاستوسیست، سعی در بررسی ارتباط بین این روش و تغییر بیان ژن های رده ی سلولی تروفواکتودرم نمودیم. بدین منظور تعداد 421 بلاستوسیست برون تنی موش از نژاد NMRIپس از انجام IVF، و کشت به مدت5/4- 4 روز در محیط آزمایشگاه، به دست آمدند و به طور تصادفی به سه گروه تقسیم شدند. گروه اول پس از قرارگیری در محیط های انجماد، به وسیله ی کرایوتاپ درون ازت غوطه ور و سپس ذوب شدند. گروه دوم پس از انجام تکنیک سوراخ نمودن مصنوعی، بلافاصله منجمد- ذوب گردیدند. سپس هر دو گروه از نظر زنده مانی، خروج از زونا و بیان ژن ها با نتایج گروه سوم (کنترل) مقایسه شدند.در این مطالعه، میزان خروج از زونا با سوراخ کردن مصنوعی بلاستوسیست قبل از انجماد، به صورت معنی داری افزایش یافت. این در حالی است که میزان زنده مانی در گروه های تحت تیمار، مشابه با گروه کنترل، بالا بود. انجماد شیشه ای موجب افزایش در میزان بیان ژن های Eomesو Cdx2شد. اما با کاهش مایع بلاستوسل قبل از انجماد، میزان بیان این ژن ها نسبت به گروه انجماد شیشه ای به صورت معنی داری کاهش پیدا کرد و به گروه کنترل نزدیک شد (05/0p ). از آن جایی که هیچ نتیجه ای مبنی بر تاثیر منفی استفاده از این تکنیک مشاهده نگردید و با توجه به افزایش میزان خروج از زونا، کاهش حجم مایع بلاستوسل قبل از انجماد شیشه ای می تواند مفید واقع شود.کلید واژگان: لقاح آزمایشگاهی, بلاستوسیست, انجماد شیشه ای, سوراخ نمودن مصنوعی, ژن های Eomesو Cdx2Cryopreservation of embryos at different stages of development, including zygote, early cleavage and blastocyst stage is one of the main sections of in vitro fertilization programs. For better coordination of embryo and endometrium and also higher implantation rate, it is preferable to cryopreserved blastocyst than other stages. During cryopreservation, however, presence of blastocoelic fluid causes serious embryo damage, by ice crystal formation. Therefore in this study, the blastocoelic fluid was removed by a mechanical microneedle procedure and then quality of blastocysts was assessed by cellular and molecular methods. For this purpose, 421 of the NMRI mouse IVF produced blastocysts, randomly divided into three groups. The first group after placing in cryopreservation media, immersed in liquid nitrogen by cryotop and then thawed. The second group after artificial collapse techniques was immediately vitrified-thawed. Then both groups in terms of survival, hatching and gene expression compared with results of the third group (control). Comparison of the results showed that non-significant reduction in survival rate and significant reduction in hatching rate was occurred after vitrification. By puncturing the blastocoelic cavity before vitrification, hatching rate was significantly increased. Also Eomes and Cdx2 expression after the artificial collapse were reduced in compared with vitrification, but this result was closer to control genes expression (p.Keywords: Blastocyst, In vitro fertilization, Artificial collapse, Vitrification, Cdx2Eomes genes
-
هدفهدف از این مطالعه ارزیابی احتمالی اثرات انجماد شیشه ای روی میزان بلوغ و فراساختار اووسیتهای بالغ شده انسانی در محیط آزمایشگاه است.مواد و روش هادر این مطالعه از 292 تخمک نابالغ مرحله وزیکول زاینده و متافاز I به دست آمده از بیماران نابارور استفاده شد. تخمک ها به دو گروه تقسیم شدند: 1- تخمک های نابالغ مرحله وزیکول زاینده (تعداد=145) 2- تخمک های نابالغ مرحله متافازI (تعداد=147). تخمک ها ابتدا منجمد شده و سپس ذوب و بالغ شدند. به علاوه از 10 عدد تخمک بالغ شده به صورت In vivoبه عنوان کنترل استفاده شد. محیط بلوغ شامل Ham’s F10 به همراه FSH و LH و مایع فولیکولی بود. بعد از 36 ساعت تخمک ها از لحاظ بلوغ و فراساختار مورد ارزیابی قرار گرفتند.نتایجمیزان زنده ماندن و دژنراسیون تخمک ها در گروه متافاز I نسبت به گروه وزیکول زاینده کاهش معنی داری داشت. اما میزان بلوغ تخمک ها بین دو گروه تفات معنی داری نداشت (06/0p<). به علاوه میزان توقف بلوغ تخمک ها بین دو گروه به طور معنی داری بالاتر بود. از نظر فراساختاری تعداد گرانول های قشری در هر دو گروه به طور قابل ملاحظه ای کاهش یافت. همچنین واکوئل و تجمعات کوچکی از میتوکندری و شبکه اندوپلاسمیک صاف درون سیتوپلاسم اووسیت ها دیده شد.نتیجه گیریفرآیندهای انجماد و ذوب منجر به تغییرات فراساختاری در نواحی خاصی از اووسیت می شوند و احتمالا کاهش توانایی بلوغ اووسیت های منجمد شده می تواند مربوط به این تغییرات باشد.کلید واژگان: اووسیت انسانی, انجماد شیشه ای, بلوغ آزمایشگاهی, فراساختارAim: The aim of this study was to describe the possible effects of vitrification on maturation rate and ultrastructural morphology of in-vitro matured human oocytes.
Material andMethodsA total of 292 immature Germinal Vesicle (GV) and Metaphase I (MI) oocytes obtained from infertile patients were allocated into two groups: (i) GV oocytes (n=145), (ii) MI oocytes (n=147) . Oocytes were first vitrified and then matured in-vitro. Supernumerary fresh in-vivo matured oocytes (n=10) were used as control. in-vitro maturation media was Hams F10 supplemented with FSH and human follicular fluid. After 36h of incubation, the oocytes were investigated for nuclear maturation and ultrastructural changes .ResultsThe rate of survival and degeneration was significantly higher in Metaphase I than GV group. But, Oocyte maturation rates were not significant between groups (PConclusionFreeze/thawing procedures are associated with ultrastructural alterations in specific oocyte microdomains, presumably related to the reduced competence of cryopreserved oocytes to maturation.Keywords: Human oocyte, Vitrification, In vitro maturation, Ultrastructure -
مقدمهاز زمان اولین انجماد شیشه ای رویان موش در سال 1985، تلاش ها ی قابل توجهی برای توسعه و بهبود این تکنیک صورت گرفته است اما همچنان انجماد با اعمال آسیب های جدی بیوشیمیایی و کروموزومی بر روی رویان می تواند باعث تغییراتی در الگوی بیان ژن های دخیل در تکوین و عملکرد، کاهش لانه گزینی و نهایتا مرگ رویان گردد. هدف از این مطالعه بررسی تاثیرات انجماد شیشه ای بر زنده مانی و رشد و بررسی بیان ژن های تخصصی پرتوانی موثر در تکوین رویان از جمله ژن های Oct4 و Nanog در بلاستوسیست های منجمد- ذوب شده ی موش بود.روش کارپس از تحریک تخمک گذاری موش های ماده و استحصال بلاستوسیست، فرآیند انجماد با حضور دی متیل سولفوکسید 15%، اتیلن گلیکول 15% و ساکارز 5/0 مولار به عنوان مواد سرما محافظ در محیط های انجمادی انجام شد و بلاستوسیست ها با قرار گیری روی Cryotop، به درون ازت مایع منتقل گشتند. فرآیند ذوب نیز با شست و شوی رویان ها در محیط ذوب حاوی ساکارز 1 مولار صورت پذیرفت. نهایتا میزان زنده مانی، خروج بلاستوسیست ها از زونا و نیز بیان ژن های Oct4 و Nanog به روش real time- PCR در بلاستوسیست های منجمد- ذوب شده و شاهد ارزیابی شد.نتایجنرخ زنده مانی و خروج بلاستوسیست ها از زونا در تیمار انجماد نسبت به بلاستوسیست های منجمد نشده بطور معنی داری کاهش یافتند (81/5±43/94% در مقابل 100% برای زنده مانی و 76/11±78/57% در مقابل80/5± 88/86% برای خروج بلاستوسیست از زونا). همچنین بیان ژن های Nanog و Oct4 افزایش یافت.نتیجه گیریبا توجه به یافته های این آزمایش می توان گفت که انجماد شیشه ای بلاستوسیست موش سوری در مرحله ی بلاستوسیست می تواند باعث تغییر بیان ژن و کیفیت رویان گردد.کلید واژگان: انجماد شیشه ای, بلاستوسیست موش, ژن های Oct4 و NanogIntroductionFrom the first vitrification of mouse embryos in 1985, considerable efforts have been made to develop and improve cryopreservation techniques, but still biochemical and fetal chromosomal abnormalities caused by vitrification can cause changes in the pattern of genes expression involved in embryonic development and function, reduced implantation and fetal death. The purpose of this study was to investigate the effects of vitrification on survival and the expression of pluripotency specific genes like Oct4 and Nanog in the vitrified-warmed mouse blastocysts.
Methods & Materials: Harvested blastocysts from superovulated female mice were vitrified in the presence of dimethyl sulfoxide 15%, ethylene glycol 15% and sucrose 0.5 M as cryoprotectants and vitrified in liquid nitrogen after loading on Cryotop. Thawing process was performed by immersing the blastocysts in thawing solution prepared using sucrose 1 M. Survival and hatching rates were evaluated and also the Oct4 and Nanog genes expression in vitrified- thawed and fresh blastocysts (control group) were assessed by real time-PCR method.ResultsSurvival and hatching rates decreased significantly in vitrified blastocysts compared with control group (94.43± 5.81% vs. 100% for survival and 57.78± 11.76% vs. 86.88± 5.80% for hatching). Also increased expression of Nanog and Oct4 genes were observed in vitrified- warmed blastocysts.ConclusionConsidering the results of this study, it can be said that vitrification of mouse embryo at the blastocyst stage can change gene expression and quality of the embryo.Keywords: Vitrification, Mouse blastocyst, Oct4, Nanog genes -
در سال های اخیر، در کشور ما نیز توجه زیادی به گیاهان دارویی شده است. از آن جا که گونه های مختلف گیاه مرزه بر اثر برداشت بی رویه از عرصه های طبیعی توسط انسان و تنش های زنده و غیرزنده تهدید شده و کشت کار پی درپی یک گونه باعث کاهش تنوع ژنتیکی آن ها می گردد، حفظ ذخایر ژنتیک این گونه ها از اهمیت بالایی برخوردار است. با استفاده از تکنیک نگهداری بذر در دمای فراسرد که یکی از روش های نگهداری ژرم پلاسم در شرایط خارج از رویشگاه است، می توان بذر را به طور طولانی مدت، با هزینه بسیار کمتر و بدون از دست دادن قوه نامیه ذخیره سازی کرد. برای نگهداری بذر Satureja spicigera در شرایط فراسرد، از پیش تیمارهای گلیسرول، محلول ویتریفیکاسیون گیاهی Plant Vitrification Solution 2 PVS2)) و کاهش رطوبت بذر قبل از ورود به ازت مایع استفاده شد. بذرهای تیمار شده به مدت یک هفته، یک ماه و سه ماه در دمای -196 ºC نگهداری شدند. در این تحقیق شاخص های جوانه زنی و رشد (درصد جوانه زنی، سرعت جوانه زنی) بذر ارتودکس گونه مرزه S. spicigera در شرایط فراسرد به مدت یک هفته، یک ماه و سه ماه مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج نشان داد که بین پیش تیمارهای مختلف، از لحاظ شاخص جوانه زنی و سرعت جوانه زنی اختلاف معنی داری وجود دارد و می توان با استفاده از فناوری فراسرد و بکارگیری پیش تیمار مناسب، بذر این گونه ارزشمند و در حال خطر را، برای مدت زمان بسیار طولانی حفظ و از انقراض این گونه منحصر به فرد جلوگیری نمود.کلید واژگان: مرزه, فراسرد, ژرم پلاسم, گلیسرول, ویتریفیکاسیونIn recent years, our country has drawn an increasing amount of attention to medicinal plants. Because different plant species Savory inappropriate harvesting of natural areas by humans, and the growing threat of biotic and abiotic stresses following the work resulted in reduced genetic diversity of a species is, a species of genetically keep reserves Curb upper's. Seed storage techniques using ultracold temperatures is one way of maintaining germplasm habitat conditions are outside, you can seed a long time, with much less cost and without loss of viability on storage. Using seed cryopreservation, as one of the Ex situ plant germplasm conservation method we can store seed for long-term, with much lower expenses and without losing seed viability. In order to preserve Satureja spicigera seed under -196ºC condition, three pre-cryopreservation treatments, PVS2 solution, Desiccation and Glycerol were applied. The treated seeds were transferred into Liquid Nitrogen (LN) and stored for 7, 30 and 90 days respectively. In this study the effect of cryopreservation on germination and growth indices (germination percent, germination rate, seed vigour index, plantlet length on orthodox seeds of plant species (Satureja spicigera) in storage conditions of cryopreservation (-196ºC) were evaluated for 7, 30 and 90 days. Comparing treatments, significant differences were observed on germination indices and germination rate. The results showed that, the long-term preservation of the species, seed in -196 ºC using suitable precryopreservation treatment is possible.Keywords: atureja, Cryopreservation, Germplasm, Glycerol, Vitrification
- نتایج بر اساس تاریخ انتشار مرتب شدهاند.
- کلیدواژه مورد نظر شما تنها در فیلد کلیدواژگان مقالات جستجو شدهاست. به منظور حذف نتایج غیر مرتبط، جستجو تنها در مقالات مجلاتی انجام شده که با مجله ماخذ هم موضوع هستند.
- در صورتی که میخواهید جستجو را در همه موضوعات و با شرایط دیگر تکرار کنید به صفحه جستجوی پیشرفته مجلات مراجعه کنید.