شناسایی مولکولی پپتیدتوکسین MeBTX از غدد زهری عقرب مزوبوتوس اپئوس ایران

پلی پپتید های زهر عقرب علاوه بر عملکرد روی کانال های یونی، در فعالیت های ضد میکروبی نیز نقش دارند. در این مطالعه یک پپتید توکسین از زهر یکی از فراوان ترین عقرب های بومی ایران به نام مزوبوتوس اپئوس (Mesobuthus eupeus) تکثیر و توالی نوکلئوتیدی آن مورد شناسایی ملکولی قرار گردید. پس از شناسایی عقرب، مجموع کل RNA از غده زهر آن استخراج و غلظت آن با دستگاه اسپکتروفوتومتر اندازه گیری شد. سپس به منظور ساخت cDNA، از کل RNA به عنوان رونوشت و از الیگو (dT) اصلاح شده به عنوان آغازگر استفاده گردید. در ادامه، با استفاده از تکنیک RT-PCR پس از بهینه سازی شرایط PCR، یک قطعه cDNA تکثیر گردید. با استفاده از برنامه آنالیز پپتید راهنما مشخص شد که این پلی پپتید کد شده توسط این cDNA دارای یک پپتید راهنما می باشد که اسید آمینه گلایسین در وضعیت بیستمین اسید آمینه به عنوان شروع پلی پپتید بالغ محسوب می گردد. همترازی این پلی پپتید با توالی های مشابه در بانک ژن NCBI نشان داد که این ژن به میزان 96، 94 و 67 درصد با نروتوکسین های طویل از عقرب های martensii، M.، Buthus occitanus Israelis و Tityus costatus به ترتیب، شباهت دارد. مقایسه این cDNA با ژن های مشابه از دیگر گونه های عقرب نشان داد که این ژن در ناحیه بین اسید آمینه 85-55 حاوی یک دومین بنام «Arthropod defensin» است. این دومین که غنی از سیستئین می باشد به خانواده ای از پپتید های ضد باکتریایی که عمدتا روی میکروب های گرم مثبت موثرند، متعلق است. وجود تشابه بالا به همراه وجود 6 سیستئین محافظت شده و همچنین نتایچ فیلوژنی همگی دلالت بر این دارد که این ژن احتمالا یک عضو جدید از خانواده پپتید توکسین ها از عقرب مزوبوتوس اپئوس ایران است که در مقایسه با توالی های مشابه از منشاء مشترکی سرچشمه گرفته اند.