چگونگی تکوین سلول های شبکیه از طریق انتقال ژن PAX6 به سلول های CD133+ به دست آمده از بند ناف انسان

سلول های بنیادی CD133+ بند ناف، زیر گروهی از سلول های خونساز را تشکیل می دهند. ثابت شده که این سلول ها از توانایی تمایز خوبی به سمت سلول های عصبی برخوردار هستند. ژن PAX6 جزیی از خانواده چند ژنی PAX و از فاکتور های رونویسی است. ژن PAX6 ژن کنترل کننده اصلی تکامل چشم و اندام های حسی بافت های اپیدرمی و عصبی می باشد. هدف از این مطالعه، بررسی روند تمایزی سلول های CD133+ به دست آمده از بند ناف که ژن PAX6(5a) به آن ها انتقال یافته است بود.
در یک مطالعه تجربی، ابتدا سلول های تک هسته ای خون بند ناف به وسیله فایکول جدا شدند، سپس سلول های CD133+ موجود در آن با روش MACS جدا و در محیط کشت Stem Span کشت داده شدند. سپس به منظور ساخت ویروس، وکتور ناقل ژن PAX6 و وکتورهای کمکی(pMD2G، psPAX2) به سلول های HEK293T ترانسفکت شدند. پس از تغلیظ ویروس و تیتر کردن آن، سلول های CD133+ با تیتر مطلوب ویروس آلوده شدند. سلول های حاوی ویروس مورد نظر، از نظر وجود پروتئین های PAX6، Rhodopsin، Chx10، Thy1 و Nestin توسط روش ایمنوسایتوشیمی ارزیابی شدند.
پس از دو هفته پروتئین های Thy-1، Chx10، Nestin و PAX6 در سلول های آلوده شده بیان شدند. هم چنین بیان مارکرهای Rhodopsin و Nestin در سلول های کنترل مشاهده شد.
نتایج حاصل از این مطالعه بیانگر تمایز سلول های CD133+ به سلول های پروژنیتوری عصبی و سلول های شبه عصبی شبکیه از جمله سلول های گانگلیونی می باشد.