بهینه سازی روش استخراجRNA از بافت پوست شاخه درختان خانواده مخروطیان

فرآیند استخراج RNA از بافت های سخت چوبی و به طور خاص درختان خانواده مخروطیان به دلیل داشتن غلظت های بالایی از ترکیبات فنولیک، پلی ساکاریدها، متابولیت های ثانویه و لیگنین، بسیار مشکل است و تا به حال هیچ گونه کیت تجاری برای این منظور ساخته نشده است. در این مطالعه مشکلات فوق برطرف گردیده و روشی سریع، ساده و اقتصادی برای استخراج RNA از بافت ساقه گونه های Cedrus deodara و Abies grandis که هر دو از خانواده مخروطیان می باشند، ارائه شده است. نسبت جذب نوری در طول موج های 260 به 280 و 260 به 230 نانومتر، به ترتیب 88/1 و 1/1 برای گونه Cedrus deodara و 8/1 و 9/0 برای گونه Abies grandis به دست آمد. تغییرات صورت گرفته در جهت بهینه سازی استخراج RNA نیز شامل استفاده از تیمار پیش گرما روی بافر استخراج، کاهش دور سانتریفیوژ حذف آلودگی DNA و حذف DEPC می باشد. ساخت cDNA با استفاده از RNA استخراج شده با موفقیت انجام و واکنش RT-PCR باندهای مورد انتظار را تولید نمود. لذا به نظر می رسد این روش برای استخراج RNA از بافت های چوبی مناسب است.