همسانه سازی و توالی یابی ژن های ویرولانسompA و smpAاسنیتوباکتربامانی جدا شده از نمونه-های بیمارستانی

اسنیتوباکتربامانی یک پاتوژن نوظهور و مهم در بروز عفونت های مختلف بیمارستانی از قبیل، عفونت دستگاه ادراری، بیمارستانی، مننژیت و دستگاه تنفسی می باشد. این میکروارگانیسم حدود سه دهه است که شیوع گسترده ای پیدا کرده و به کلاس های مختلف آنتی بیوتیک مقاوم شده اند. هدف از این مطالعه جداسازی، کلونینگ و توالی یابی دو ژن ویرولانس کاندیدای تهیه واکسن بر علیه اسنیتوباکتربامانی می باشد.
تعداد 30 نمونه عفونت های مختلف بیمارستانی(عفونت زخم، خون و عفونت های ادراری) از بیمارستان های امام علی(ع) و آیت الله کاشانی شهرکرد تهیه شد. نمونه ها بر روی محیط های بلاد آگار و مک کانکی آگار کشت داده شدند. جداسازی و تشخیص به روش های میکروسکوپی، کشت میکروبی و بیوشیمیایی انجام شد. دو ژن ompA و smpA با تکنیک PCR جداسازی و درون وکتور پلاسمیدی pTZ57R/T کلون شدند. صحت سازواره نوترکیب به دو روش PCR و هضم آنزیمی دوگانه انجام شد. دو ژن ompA و smpA کلون شده در پلاسمید pTZ57R/T توالی یابی شدند.
از 30 نمونه جمع آوری شده، 10 ایزوله اسنیتوباکتربامانی(33/33%)تشخیص داده شد. الکتروفورز محصولات PCR دو باند 1150 و 411 جفت بازی بدست آمد که به ترتیب مربوط به ژنهای ompA و smpA بود. پلاسمید pTZ57R/T دارای بازده بالا و صحت همسانه سازی به دو روش PCR و هضم آنزیمی دوگانه دو باند 1150 و 411 جفت بازی را نشان داد. نتایج توالی یابی تشابه 95-90 درصدی دو ژن ompA و smpA با توالی رفرنس در ncbi را تایید کرد.
نتایج بدست آمده نشان داد که پلاسمید pTZ57R/T برای کلون سازی قطعات بزرگDNA مناسب می باشد و با توجه به حفاظت شدگی بالای دو ژن ompA و smpA برای ساخت واکسن می توان از آنها استفاده نمود.